尿酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 黃嘌呤氧化酶通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積
　　目的:
　　血清尿酸水平在非酒精性脂肪性肝病患者中顯著升高，然而其背后的分子機(jī)制尚未清楚。在本研究中，我們將以尿酸代謝關(guān)鍵酶黃嘌呤氧化酶(Xanthineoxidase，XO)為切入點(diǎn)，探索尿酸在非酒精性脂肪性肝病發(fā)生發(fā)展的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取8～10周齡的雄性C57BL

2、/6小鼠，分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對(duì)小鼠肝臟脂肪變性的影響。體外實(shí)驗(yàn)選取人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞，采用游離脂肪酸刺激48h誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝病體外細(xì)胞模型，采用不同濃度尿酸刺激HepG2細(xì)胞48h構(gòu)建尿酸刺激模型來(lái)觀察尿酸體外刺激對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響。利用熒光定量PCR(qRT-PCR)及WB等手段檢測(cè)XO的mRNA、蛋白及活性表達(dá)。體外采用小于擾RNA干擾技術(shù)抑制XO及NLRP3表達(dá)

3、，體外采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)增強(qiáng)XO表達(dá)，體內(nèi)外采用別嘌呤醇抑制XO活性。利用肝細(xì)胞甘油三酯含量測(cè)定和油紅O染色觀察XO表達(dá)及活性變化、尿酸刺激對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響，進(jìn)一步采用qRT-PCR及WB等分子生物學(xué)手段分析XO及尿酸對(duì)NLRP3炎性小體復(fù)合物的調(diào)控作用。
　　結(jié)果:
　　尿酸在體內(nèi)外直接誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性;XO表達(dá)及活性在非酒精性脂肪性肝病小鼠及細(xì)胞模型中表達(dá)均顯著升高;體外抑制XO表達(dá)減少尿酸生成并顯著減輕肝細(xì)胞甘油

4、三酯含量和脂質(zhì)沉積;體外增強(qiáng)XO表達(dá)顯著加重肝細(xì)胞甘油三酯含量和脂質(zhì)沉積;體內(nèi)抑制XO活性顯著減輕高脂飲食誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積;進(jìn)一步研究表明XO通過(guò)調(diào)控尿酸代謝誘導(dǎo)NLRP3炎性小體的激活。
　　結(jié)論:
　　XO可能通過(guò)調(diào)控尿酸代謝激活NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞脂肪貯積，XO可能成為非酒精性脂肪性肝病的潛在分子治療靶點(diǎn)。
　　第二部分 尿酸通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞胰島素抵抗
　　目的:

5、r>　　高尿酸血癥與葡萄糖代謝異常及胰島素抵抗密切相關(guān)，然而其背后的分子機(jī)制尚未清楚。在本研究中，我們將探索尿酸在胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的作用及其分子機(jī)制。
　　方法:
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取8-10周齡的雄性C57BL/6小鼠，分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食、高脂飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對(duì)小鼠肝臟胰島素抵抗的影響。體內(nèi)采用別嘌呤醇降低尿酸治療觀察其對(duì)非酒精性脂肪性肝病小鼠模型肝臟胰島素抵抗的影響。體外實(shí)驗(yàn)選取人肝

6、癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞采用不同濃度尿酸刺激HepG2細(xì)胞構(gòu)建尿酸刺激模型，體外采用小干擾RNA技術(shù)抑制NLRP3表達(dá)。進(jìn)一步采用WB等分子生物學(xué)手段分析尿酸及NLRP3對(duì)胰島素信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果:
　　高脂飲食可以誘導(dǎo)小鼠肝臟胰島素抵抗;尿酸在體內(nèi)直接誘導(dǎo)小鼠肝臟胰島素抵抗;別嘌呤醇降尿酸治療可以減輕高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟胰島素抵抗;尿酸在體外可以損害肝細(xì)胞胰島素信號(hào)通路;體外抑制NLRP3可以減輕尿酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞胰島