弱激光對臍血CD34+細(xì)胞CFU-GM形成的影響.pdf

1、背景和目的:臍血是造血干細(xì)胞的重要來源之一，但是臍血中含有的有核細(xì)胞數(shù)相對較少制約了其在成人患者中的應(yīng)用。CD34是造血干/祖細(xì)胞的表面標(biāo)記。臍血造血干/祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增是解決這一問題的方法之一，但是目前仍未找到最佳的擴(kuò)增方法和體系。
　　弱激光（LLLT）是指波長在600-1100nm，輸出能量在1-500mW的紅色或近紅外激光。由連續(xù)或者脈沖類型的弱激光在較低的能量密度（0.04-50 J/cm2）下直接作用于靶組織或者單層細(xì)

2、胞，不直接引起生物組織發(fā)生不可逆性損傷，而產(chǎn)生一系列的生物刺激作用。
　　既往大量研究表明弱激光對生物組織有多方面的刺激作用，如促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、黏附，影響細(xì)胞凋亡等等，其可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的效應(yīng)已在多種細(xì)胞系中得到證實(shí)，比如可以促進(jìn)表皮細(xì)胞、骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的增殖，從而可以促進(jìn)傷口的愈合、骨的修復(fù)、神經(jīng)的再生等。
　　弱激光對造血干/祖細(xì)胞的作用的研究甚少，有人應(yīng)用685nm弱激光以0.1-2.0 J/cm2照射

3、動(dòng)員后外周血造血干細(xì)胞，然而弱激光對臍血造血干/祖細(xì)胞的研究國內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報(bào)道。本研究初步探討弱激光對臍血CD34+造血干/祖細(xì)胞CFU-GM形成能力的影響，為弱激光對造血干/祖細(xì)胞的研究提供新的思路。
　　方法:
　　1.收集鶴壁市京立醫(yī)院產(chǎn)科足月分娩嬰兒的臍血，采用免疫磁珠法分選臍血 CD34+細(xì)胞，在35mm培養(yǎng)皿中采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基法建立集落形成細(xì)胞檢測（最終每個(gè)培養(yǎng)皿中細(xì)胞數(shù)為1×103），然后經(jīng)0、0.5

4、、1、2、4 J/cm2850nm弱激光照射后在37℃，5％CO2下培養(yǎng)14天，觀察其形成集落數(shù)的差別。
　　2.將上述分選后的CD34+細(xì)胞構(gòu)建甲基纖維素集落形成細(xì)胞檢測，分為對照組、1 J/cm2弱激光組、NAC（N-乙酰半胱氨酸）組以及弱激光（1 J/cm2）+NAC組給予相應(yīng)處理后，在37℃，5%CO2下培養(yǎng)14天，觀察其形成集落數(shù)的差別。
　　結(jié)果:
　　1．經(jīng)不同能量密度弱激光照射后形成的CFU-GM計(jì)數(shù)有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，通過各實(shí)驗(yàn)組與對照組的兩兩比較發(fā)現(xiàn)，0.5、1、2、4 J/cm2弱激光照射后CFU-GM計(jì)數(shù)與對照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)0.5 J/cm2和1 J/cm2弱激光照射后，CFU-GM計(jì)數(shù)較對照組升高，而經(jīng)2 J/cm2和4 J/cm2弱激光照射后的CFU-GM計(jì)數(shù)較對照組下降。1 J/cm2弱激光照射后的臍血CD34+細(xì)胞CFU-GM計(jì)數(shù)最高；
　　2．經(jīng)弱激光和/或NAC處理后組間CFU-GM計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，

6、經(jīng)兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，對照組與弱激光組、對照組與NAC組、弱激光組與弱激光+NAC組、NAC組與弱激光+NAC組CFU-GM計(jì)數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)弱激光處理后CFU-GM計(jì)數(shù)較對照組升高，而對比弱激光組與弱激光+NAC組CFU-GM計(jì)數(shù)可發(fā)現(xiàn)，NAC可逆轉(zhuǎn)弱激光引起的CFU-GM計(jì)數(shù)升高。
　　結(jié)論:
　　1．850nm弱激光在0.5-4.0 J/cm2可影響臍血CD34+細(xì)胞CFU-GM形成，在1 J/cm2時(shí) CFU-GM計(jì)