組織特異性干預(yù)小鼠鞏膜PPARα對(duì)小鼠屈光發(fā)育的影響.pdf

1、目的:
　　近視是發(fā)病率高的屈光不正，近年來(lái)近視人數(shù)日益增多，但其發(fā)病機(jī)制未明。有研究發(fā)現(xiàn)PPARα激動(dòng)劑玻腔注射可以抑制小雞鏡片誘導(dǎo)性近視形成，本實(shí)驗(yàn)室研究也發(fā)現(xiàn)球旁注射PPARα激動(dòng)劑非諾貝特及GW7647可以抑制豚鼠形覺(jué)剝奪性近視的形成;這些均表明PPARα可能參與了對(duì)近視的調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)RNA-sequence研究也發(fā)現(xiàn)形覺(jué)剝奪小鼠鞏膜內(nèi)PPARα及其下游靶基因的表達(dá)下調(diào)，提示形覺(jué)剝奪性近視過(guò)程中伴隨著PPARα通路活

2、性的下降。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)了PPARα全身敲除的小鼠，發(fā)現(xiàn)PPARα缺失可誘導(dǎo)小鼠屈光發(fā)育顯著向近視方向偏移，說(shuō)明PPARα參與了小鼠屈光發(fā)育及正視化的調(diào)節(jié)。鞏膜作為最終的效應(yīng)器官，在近視過(guò)程中普遍會(huì)發(fā)生胞外基質(zhì)重塑的過(guò)程。通過(guò)對(duì)PPARα敲除小鼠模型的研究，本課題組也發(fā)現(xiàn)PPARα全身敲除小鼠鞏膜膠原表達(dá)顯著低于同窩仔野生型小鼠。在原代培養(yǎng)的鞏膜成纖維細(xì)胞上我們也發(fā)現(xiàn)PPARα激動(dòng)劑非諾貝特可以顯著抑制細(xì)胞中膠原的合成。因此，

3、為明確鞏膜PPARα在近視形成中的調(diào)控作用，本研究擬通過(guò)特異性干預(yù)鞏膜PPARα，明確鞏膜PPARα對(duì)小鼠屈光發(fā)育的調(diào)控作用。
　　方法:
　　采用出生后21日齡的野生型(willdtype，WT)雄性近交C57BL6小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。將經(jīng)過(guò)屈光等參數(shù)篩選出的小鼠隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組，不做任何處理;對(duì)照病毒組，右眼注射病毒;包裝目的序列的病毒組，右眼注射病毒。采用Tenon's囊下病毒注射方式，分別注射PPARα過(guò)表達(dá)病

4、毒和shRNA敲減病毒兩種不同的病毒。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)病毒注射的有效性和特異性，并檢測(cè)鞏膜Ⅰ型膠原的變化情況。
　　結(jié)果:
　　(1) Tenon's囊下注射過(guò)表達(dá)病毒后，注射病毒眼的鞏膜PPARα轉(zhuǎn)錄水平顯著增加，鞏膜膠原及PPARα下游靶基因mRNA水平?jīng)]有明顯變化;小鼠屈光發(fā)育沒(méi)有明顯變化，眼軸沒(méi)有明顯變化;(2)與對(duì)側(cè)眼相比，Tenon's囊下注射AAV8-shPPARα病毒2，4周后，小鼠注射眼屈光顯著向近視

5、方向偏移（2周:注射眼-2.47±0.45D vs.對(duì)側(cè)眼-0.26±0.05，p＜0.01;4周:注射眼-0.79±0.14 vs.對(duì)側(cè)眼2.56±0.47，p＜0.001）;與對(duì)側(cè)眼相比，注射病毒眼的眼軸、前房深度、玻璃體腔深度、晶體厚度、角膜前后表面曲率均沒(méi)有明顯變化。與對(duì)側(cè)眼相比，注射AAV8-Scarmble病毒組注射眼屈光、眼軸等參數(shù)變化不明顯。
　　結(jié)論:
　　組織特異性過(guò)表達(dá)鞏膜PPARα對(duì)小鼠的屈光發(fā)育沒(méi)有