土槿乙酸對NC-Nga小鼠特應(yīng)性皮炎的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本文研究傳統(tǒng)中藥土槿皮有效成分土槿乙酸（PB）對NC/Nga小鼠特應(yīng)性皮炎（AD）的治療作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.體內(nèi)研究
　　1.1 PB對NC/Nga小鼠AD的藥效學(xué)研究:灌胃給藥觀察不同劑量的PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）對NC/Nga小鼠AD作用后的皮損炎癥評分、體重變化、脾臟指數(shù)、血清IgE含量， H&E染色檢測皮膚組織病理學(xué)變化。
　　1.2 RT-

2、PCR法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠脾臟及皮膚組織中T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4、ASC、caspase-1、IL-1β、NLRP3、PPAR-γ、PPAR-δ、TLR-2、TLR-4、IL-17a、IL-17Ra、IL-22mRNA基因表達(dá)的影響。
　　1.3 ELISA法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠血清IgE和相關(guān)細(xì)胞因子IL-1β、IL-17和IL-22含量的影響。
　　1.4 Wester

3、n-blot法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠脾臟磷酸化AKT(Ser473)、RSK-2及磷酸化ⅠκBα(Ser32/Ser36)蛋白表達(dá)的影響。
　　2.體外研究
　　2.1 MTT法檢測PB體外對小鼠胸腺和脾臟細(xì)胞的毒性及對淋巴細(xì)胞增殖抑制作用。MTT法測定PB在體外對小鼠胸腺和脾細(xì)胞的毒性作用，并分析刀豆蛋白A（ConA）及脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　2.2熒光素酶報

4、告基因檢測 PB對轉(zhuǎn)染報告基因質(zhì)粒的 RAW264.7細(xì)胞PPAR-γ轉(zhuǎn)錄激活。
　　結(jié)果：
　　1.不同劑量PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）灌胃給藥后，中、高劑量組明顯改善NC/Nga小鼠的體重下降、脾指數(shù)升高；H&E染色顯示中、高劑量組能明顯減輕NC/Nga小鼠的表皮增厚和水腫，減少炎癥細(xì)胞浸潤，以上證明PB對NC/Nga小鼠AD具有顯著的治療作用。
　　2.RT-PCR和ELISA結(jié)果顯示PB

5、能夠下調(diào)炎癥因子TNF-α及炎癥小體NLRP3、IL-1β、Caspase-1的基因表達(dá)；抑制IL-22和IL-17a的表達(dá)和分泌；同時促進(jìn)PPAR-γ和PPAR-δ基因表達(dá)；抑制TLR-2和TLR-4基因的表達(dá)以及NF-κB通路信號分子Ⅰ-κBα的活性表達(dá)；此外，PB還能明顯抑制AKT活化及RSK-2表達(dá)，通過多個作用靶點(diǎn)，從而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫-炎癥反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)。
　　3.MTT法檢測發(fā)現(xiàn)，PB在體外對小鼠胸腺和脾淋巴細(xì)胞無明顯的細(xì)胞毒

6、性，IC50>1mmol/L，優(yōu)于陽性藥霉酚酸酯（23.22μmol/L），呈現(xiàn)時間-劑量依賴性地抑制ConA誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖，同時，對LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖亦表現(xiàn)出一定程度的抑制作用，但其效應(yīng)低于陽性對照藥，提示 PB可能選擇性抑制 T細(xì)胞活化增殖。熒光素酶報告基因分析，PB能夠激活RAW264.7細(xì)胞中的PPAR-γ轉(zhuǎn)錄活性，上調(diào)PPAR-γ表達(dá)。
　　結(jié)論：PB對 NC/Nga小鼠 AD有良好的治療效果，能夠通過抑制 I