基于大鼠POI模型對減味壽胎丸雌激素樣作用的研究.pdf

1、目的:
　　探究減味壽胎丸對大鼠原發(fā)性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency，POI)模型的影響。
　　探究減味壽胎丸提取物對MCF-7細(xì)胞增殖活力的影響。
　　探究減味壽胎丸提取物對雌激素受體(Esterogen receptor，ER)熒光素酶報告基因表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1.雷公藤多苷造大鼠POI模型
　　SD大鼠分為5組:對照組、模型組、陽性對照組及減

2、味壽胎丸高、中、低劑量組。雷公藤多苷片50mg/kg灌胃30d造大鼠POI模型，計算動情周期紊亂次數(shù)、卵巢及子宮指數(shù)。放射免疫檢測血清雌二醇(Estradiol，E2)、卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)、黃體生成素(Luteinizing hormone，LH)、FSH/LH水平，HE染色法檢測卵巢及子宮病理形態(tài)，western blot檢測卵巢、子宮ER表達(dá)，免疫組化檢測下丘腦及垂體ERα

3、的表達(dá)。
　　2.MCF-7細(xì)胞增殖實驗
　　MCF-7細(xì)胞96孔板接種，分為5組:1‰DMSO組、減味壽胎丸0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml組、0.1uM E2組，相應(yīng)藥物干預(yù)48h后以MTT法檢測MCF-7細(xì)胞的增殖活力。
　　3.ER熒光素酶報告基因檢測實驗
　　MCF-7細(xì)胞接種6孔板，分為6組:1‰DMSO組、減味壽胎丸0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml

4、組、0.1uM E2及1uM ICI182，780組，將質(zhì)粒用轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞內(nèi)，檢測熒光素酶活性。
　　結(jié)果:
　　1.減味壽胎丸對大鼠POI模型的影響
　　(1)動情周期:與空白組相比，模型組大鼠D1-D30、D21-D30動情周期紊亂次數(shù)較高，P＜0.01;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠D1-D30、D21-D30動情周期紊亂次數(shù)較低，P＜0.5，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)血清激

5、素水平:與空白組相比，模型組及減味壽胎丸低劑量組大鼠血清FSH較高，P＜0.001，有非常顯著差異。與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中劑量組大鼠血清FSH較低，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　與空白組相比，模型組以及減味壽胎丸低劑量大鼠血清E2水平較低，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高劑量組大鼠血清E2水平較高，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　與空白組相比，模型組及減味壽胎丸

6、低劑量組大鼠血清FSH/LH較高，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與模型組相比陽性組及減味壽胎丸高、中劑量組大鼠血清FSH/LH較低，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　各組與空白組相比，P＞0.05，各組血清LH無明顯差異;各組與模型組，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(3)卵巢及子宮指數(shù):與空白組相比，模型組卵巢指數(shù)較低，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組卵巢指數(shù)較高

7、，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　與空白組相比，模型組子宮指數(shù)較低，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組子宮指數(shù)較高，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(4)卵巢及子宮病理形態(tài):模型組卵泡較少，而其它組均可見各級卵泡。各組大鼠子宮病理形態(tài)無明顯差異。
　　(5)卵巢ER表達(dá):與空白組相比，模型組卵巢ERα表達(dá)顯著下調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異;與空白組相比，陽

8、性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠卵巢ERα表達(dá)相比明顯增高，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　與空白組相比，模型組大鼠卵巢ERβ表達(dá)明顯下調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸各劑量組大鼠卵巢ERβ表達(dá)明顯上調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　(6)子宮ER表達(dá):與空白組相比，模型組及減味壽胎丸中、低劑量組大鼠子宮ERα表達(dá)明顯下調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比，陽

9、性組及減味壽胎丸各劑量組大鼠子宮ERα表達(dá)明顯上調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　與空白組相比，模型組大鼠子宮ERβ表達(dá)明顯下調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠子宮ERβ表達(dá)明顯上調(diào)，P＜0.001，有非常顯著差異。
　　(7)下丘腦及垂體ERα表達(dá):與空白組相比，模型組大鼠下丘腦ERα表達(dá)下調(diào)，P＜0.01，有顯著差異;同模型組相比，陽性組及減味壽胎丸高、中劑量

10、組大鼠的下丘腦ERα表達(dá)明顯增高，P＜0.01，有顯著差異。
　　與空白組相比，模型組大鼠的垂體ERα表達(dá)水平明顯降低，P＜0.001，有非常顯著差異;與模型組相比陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠垂體ERα表達(dá)水平上調(diào)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.減味壽胎丸對MCF-7細(xì)胞增殖活力的影響
　　(1)與空白組相比0.001mg/ml減味壽胎丸提取物組及0.1uM E2組細(xì)胞增殖活力較高，P＜0.05，

11、差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)與空白組相比0.001mg/ml減味壽胎丸提取物組及0.1uM E2組細(xì)胞ERα表達(dá)水平較高，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.減味壽胎丸對ER熒光素酶報告基因表達(dá)的影響
　　與空白組相比，0.1mg/ml、0.01mg/ml減味壽胎丸及1uM ICI182，780組提取物組熒光素酶活性降低，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　0.001mg/ml減味壽胎丸提取物及0.1u

12、M E2組熒光素酶活性提高，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.以減味壽胎丸干預(yù)雷公藤多苷POI大鼠模型，具有上調(diào)血清E2水平、下調(diào)血清FSH及FSH/LH水平、提高POI大鼠卵巢、子宮指數(shù)及卵泡數(shù)量，上調(diào)POI大鼠卵巢、子宮、下丘腦及垂體的ER表達(dá)，減少動情周期紊亂次數(shù)等作用。減味壽胎丸對POI大鼠的影響表現(xiàn)出了一定的雌激素樣作用。
　　2.0.001mg/ml減味壽胎丸提取物在體外表現(xiàn)出了一定的雌