阿帕替尼對卡維地洛體內外代謝影響研究.pdf

1、目的：
　　建立同時檢測微粒體和血漿中卡維地洛及其三個主要代謝產物4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的超高液相色譜-質譜(UPLC-MS)的方法，研究阿帕替尼對卡維地洛體內外代謝的影響。
　　方法：
　?、偃烁?、鼠肝微粒體和大鼠血漿樣品用乙腈沉淀后檢測。采用Acquity U-HPLCBEH C18柱為分離柱，流動相采用乙腈-0.1％甲酸體系，梯度洗脫;采用AB SciexQTRAP5500三重四級桿質譜儀（電噴霧

2、離子源）進行質譜檢測，CAR及其三個主要代謝產物4'-HPC、5'-HPC、o-DMC和內標美托洛爾采用多反應監(jiān)測(MRM)的方法檢測，五個物質的MRM分別是m/z406.94→99.87、m/z423.10→99.93、m/z423.03→99.93、 m/z393.03→209.88、m/z268.10→116.00。
　　②制備人肝、鼠肝微粒體，進行體外微粒體孵育實驗。200μL體系中含有肝微粒體（大鼠肝微粒體0.44 mg

3、·mL-1、人肝微粒體0.44 mg·mL-1）、0.1M Tris-HCl、抑制劑、2.5μM卡維地洛和1 mmol·L-1 NADPH。不同濃度的阿帕替尼加入到上述體系中，以計算半數(shù)最大抑制濃度(IC50)。加入不同濃度的卡維地洛，使卡維地洛的終濃度依次為0.01、0.1、1、5、10、25、50、100μM，計算Km值。
　　③雄性SD大鼠15只，隨機分為3組（A組、B組和C組），每組5只。A組口服給予50 mg/kg阿帕替

4、尼，一天一次，共計一周;B組用0.3％ CMC代替，共計6天，第七天給予50 mg/kg阿帕替尼;C組為對照組。在實驗的第七天，A組動物在給予阿帕替尼0.5 h后灌胃給予12 mg/kg卡維地洛，C組動物直接灌胃給予12 mg/kg卡維地洛。A組、B組、C組在給予卡維地洛后不同時間點尾靜脈取血。用建立的方法同時測定血漿中CAR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的濃度。用DAS程序計算主要藥代動力學參數(shù)。
　　結果：
　

5、　①CAR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的保留時間分別為3.24、1.92、2.05和2.61min。血漿CAR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC分別在0.5～100 ng/mL、0.05～10 ng/mL、0.05～10 ng/mL、0.05～10 ng/mL范圍內線性關系良好。低、中、高3個濃度（CAR1、10、100 ng/mL、4'-HPC0.1、1、10 ng/mL、5'-HPC0.1、1、10 ng/mL、

6、o-DMC0.1、1、10 ng/mL)的日內RSD和日間RSD均小于15％，回收率大于90％;血漿樣品在室溫放置24 h、凍融三次、冰凍保存30天條件下均有良好的穩(wěn)定性。
　?、?00μM的阿帕替尼可以明顯抑制人肝微粒體和大鼠肝微粒體中卡維地洛代謝物的形成，但在大鼠肝微粒體的抑制率明顯大于人肝微粒體。阿帕替尼對人肝微粒體中4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的最大半數(shù)抑制濃度IC50分別是2.04μM、1.78μM和3.50μ

7、M，阿帕替尼對大鼠肝微粒體中4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的最大半數(shù)抑制濃度IC50分別是8.42μM、3.11μM和6.64μM。
　　③阿帕替尼和卡維地洛合用后，A組、B組卡維地洛的Cmax分別增加51.37％和68.67％;4'-HPC的Cmax分別降低79.86％和66.33％;5'-HPC的Cmax分別降低84.02％和69.16％。其他藥代動力學參數(shù)也相應的增加或降低。
　　結論：
　　本研究建立的