C3G基因?qū)9C2心肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響.pdf

1、目的：探討 C3G基因?qū)?H9C2心肌細(xì)胞凋亡、增殖的影響及其機(jī)制。
　　方法：設(shè)計(jì) RNA干擾序列、購(gòu)買(mǎi) pCXN2-Flag質(zhì)粒（空質(zhì)粒）及pCXN2-Flag-hC3G(過(guò)表達(dá)人C3G mRNA)質(zhì)粒，分別用空白試劑、陰性慢病毒、C3G siRNA慢病毒、C3G siRNA慢病毒+空質(zhì)粒、C3G siRNA慢病毒+過(guò)表達(dá)人C3G質(zhì)粒隨機(jī)感染和轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)被隨機(jī)分為5個(gè)組，即空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、沉默C3G組、

2、沉默C3G+空質(zhì)粒組和沉默C3G+過(guò)表達(dá)人C3G組。轉(zhuǎn)染質(zhì)粒72h后，采用RT-PCR法檢測(cè)目的基因C3G mRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞凋亡情況，MTT比色法測(cè)定細(xì)胞增殖率，Western blotting檢測(cè)細(xì)胞C3G、 p-ERK1/2、Bax及Flag的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：慢病毒感染熒光圖：經(jīng)嘌呤霉素篩選85％以上細(xì)胞被綠色熒光蛋白標(biāo)記，即85%以上細(xì)胞被慢病毒感染；與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，沉默

3、C3G組和空質(zhì)粒組的細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)水平和凋亡率均增加（P<0.01，P<0.05），各組細(xì)胞C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞增值率則均降低（P<0.01，P<0.05）；另一方面，過(guò)表達(dá)人C3G基因組的相應(yīng)結(jié)果則相反。
　　結(jié)論：沉默C3G基因能有效抑制細(xì)胞的增殖，促進(jìn)H9C2心肌細(xì)胞凋亡；過(guò)表達(dá)C3G基因能逆轉(zhuǎn)沉默C3G基因?qū)9C2心肌細(xì)胞的影響，表現(xiàn)為細(xì)胞凋亡降低，細(xì)胞增殖增加，其機(jī)制