大蒜素對TNBS誘導大鼠結(jié)腸炎的治療作用及IL-6-JAK-STAT3途徑探討.pdf

1、目的：炎癥性腸病是臨床上一類多種病因所導致的、機體異常免疫介導的腸道疾病，其突出特點是腸道反復發(fā)生的慢性非特異性炎癥，主要疾病類型包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。既往大量的研究認為，過度和失控的人體免疫產(chǎn)生針對腸道的正常腸黏膜及菌群免疫應答導致IBD的病理生理改變。有研究顯示，大蒜素能夠調(diào)節(jié)機體免疫，本實驗使用TNBS/乙醇復制結(jié)腸炎模型，通過大蒜素干預以了解大蒜素在結(jié)腸炎中的治療作用并探討可能與IL-6/JAK/STAT3途徑相關。

2、>　　方法：50只SD雄性大鼠利用隨機數(shù)表法分5組，每組10只分別命名為：①空白對照組、②TNBS模型組、③大蒜素治療組、④美沙拉嗪治療組、⑤大蒜素+美沙拉嗪治療組。將空白對照組以外的其余四組大鼠使用一定劑量的5％TNBS+50％乙醇溶液灌腸后復制大鼠結(jié)腸炎模型，每日使用大蒜素（劑量:30mg/kg）、美沙拉嗪（劑量:30mg/kg）分別及聯(lián)合干預③-⑤組治療組;空白對照組及TNBS模型組使用相同劑量的生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃干預10天，

3、期間每日觀察大鼠毛發(fā)、精神狀態(tài)、進食活動量等狀況。同時每日記錄大鼠體重，并觀察大鼠大便次數(shù)、性狀和血便等情況，然后進行DAI評分。腹腔麻醉處死大鼠后，取其血清及結(jié)腸進行相應觀察、檢測;采集各組大鼠結(jié)結(jié)腸肉眼觀察其病變情況，HE染色處理大鼠結(jié)腸標本，并進行顯微鏡下觀察并進行組織學評分。以ELISA方法檢測大鼠血清中白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素10（IL-10）的水平，用免疫組化法檢測各組大鼠結(jié)腸組織細胞中STAT3、SOCS3的表

4、達情況并計數(shù)。使用聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測結(jié)腸組織中STAT3、SOCS3mRNA表達量。利用專業(yè)統(tǒng)計學軟件分析實驗數(shù)據(jù)，得出相應結(jié)果。
　　結(jié)果：⑴大蒜素治療組、美沙拉嗪治療組、大蒜素+美沙拉嗪治療組大鼠以及TNBS模型組與空白對照組比較各項比較，大鼠DAI評分、體重、結(jié)腸組織學評分、HE染色下病理改變等指標均有顯著差異，結(jié)腸炎模型復制成功；⑵ELISA法檢測大鼠血清中IL-6水平，TNBS模型組與三組治療組均存在

5、顯著差異(p＜0.05)，從均值上來看，大蒜素+美沙拉嗪治療組檢測血清IL-6水平最低;ELISA法檢測大鼠血清中IL-10水平，TNBS模型組與三治療組均存在顯著差異(p＜0.05)，從均值上來看，大蒜素+美沙拉嗪治療組血清檢測IL-10水平最高，說明大蒜素具有抑制炎癥因子IL-6分泌的作用，而大蒜素聯(lián)合美沙拉嗪對炎癥因子的抑制作用最強；⑶免疫組化法顯示在用藥干預10天后，結(jié)腸組織中陽性細胞計數(shù)上，STAT3中表達陽性細胞數(shù)最多的是T

6、NBS模型組，空白對照組表達陽性細胞計數(shù)最少，治療組間比較，大蒜素+美沙拉嗪治療組表達STAT3量最少，與大蒜素治療組存在統(tǒng)計學差異。在SOCS3的陽性細胞計數(shù)表達中，TNBS模型組分別與余下4組分別比較存在差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);治療組間比較，大蒜素+美沙拉嗪治療組表達SOCS3細胞計數(shù)最多，與大蒜素治療組存在統(tǒng)計學差異；⑷空白對照組的結(jié)腸粘膜中STAT3及SOCS3mRNA表達較少;TNBS模型組表達STAT3對比美沙拉

7、嗪治療組及大蒜素+美沙拉嗪治療組均明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，其中TNBS模型組與大蒜素+美沙拉嗪治療組比較差異更顯著;在SOCS3的表達中，TNBS模型組對比各治療組均明顯降低，有顯著差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論：①本實驗TNBS/乙醇法大鼠結(jié)腸炎復制模型成功；②各組大鼠死亡率、體重變化、病理組織學改變、血清學檢測水平等各方面檢測有差異，經(jīng)評估分析發(fā)現(xiàn)，大蒜素灌胃對IBD模型有一定治療作用，大蒜素聯(lián)合美沙拉嗪