大鼠慢性壓迫性脊髓型頸椎病動物模型的建立及評估.pdf

1、目的：
　　脊髓型頸椎病主要由頸椎椎間盤突出或者黃韌帶硬化，長期壓迫脊髓，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙。脊髓型頸椎病發(fā)展過程、發(fā)病機制以及頸脊髓的病理生理變化目前尚不明確，由于人類活體脊髓標本很難獲取，所以我們迫切需要建立動物脊髓慢性壓迫模型用于對脊髓型頸椎病的研究。現(xiàn)有動物模型的構(gòu)建方式，如螺釘擰入法、可控氣囊或球囊壓迫法等存在因反復(fù)操作致使感染率和死亡率較高以及壓迫強度非線性增加等問題，降低了其穩(wěn)定性、科學(xué)性及實用性；而植入膨脹物法因材料

2、的膨脹速度，其壓迫模型往往類似于亞急性壓迫模型。本實驗旨在已有建模方式基礎(chǔ)上，建立更好模擬慢性發(fā)病的頸脊髓壓迫動物模型。
　　方法：
　?。?）10只健康大鼠隨機均分為實驗組和對照組。兩組動物麻醉后在C5至C7水平切開皮膚及皮下肌肉組織，用咬骨鉗小心去除部分椎板，暴露硬脊膜。在實驗組大鼠中將聚乙烯醇水凝膠置于大鼠C5-C6的椎板與硬脊膜之間。逐層止血縫合肌肉、筋膜、皮下和皮膚組織。術(shù)后大鼠清醒后,于籠中自由活動。每天觀察大鼠

3、的行為及二便情況。于術(shù)后3周再次對兩組動物行改良Rivlin斜板試驗，并行磁共振檢查。將兩組大鼠過量麻醉處死，去受壓頸脊髓標本作HE染色，觀察脊髓組織的鏡下變化。
　?。?）20只健康大鼠隨機分為直接壓迫組10只和薄膜包裹壓迫組10只，直接壓迫組大鼠在頸椎硬脊膜與椎板間植入裸露的聚乙烯醇水凝膠，方法同上；薄膜包裹壓迫組大鼠在頸椎硬脊膜與椎板間植入聚氨酯薄膜包裹造孔的聚乙烯醇水凝膠。手術(shù)前對兩組大鼠行BBB動物行為學(xué)檢測，手術(shù)后每周

4、做一次BBB檢測，第三周BBB檢測后，將所有大鼠處死并取受壓部位脊髓標本。每組中的隨機抽取五例標本行TUNEL檢查凋亡細胞，另外5例行western blot檢測caspase-3凋亡蛋白。
　　結(jié)果：
　?。?）實驗組和對照組大鼠術(shù)前改良Rivlin斜板試驗中傾斜角度平均值相似，表明兩組大鼠術(shù)前脊髓功能狀態(tài)無顯著差異。術(shù)后第三周對照組大鼠改良Rivlin斜板試驗傾斜角度平均為70.00°，實驗組大鼠的平均傾斜角度為36.1

5、7°（P<0.05）,實驗組大鼠術(shù)后的脊髓功能狀態(tài)明顯差于對照組大鼠。MRI下實驗組可見T2信號增強，信號異常區(qū)彌散狀邊界不清，脊髓結(jié)構(gòu)紊亂；硬膜背側(cè)見局部滲出積液的高信號影。病理大體檢查見實驗組大鼠頸脊髓組織較對照組損傷反應(yīng)明顯，可見血管扭曲變形、硬膜下出血點等；HE染色見對照組大鼠脊髓組織腫脹變形，有白質(zhì)脫髓鞘、膠質(zhì)細胞增生、灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細胞腫脹崩解等損傷表現(xiàn)。
　?。?）BBB評分結(jié)果顯示，直接壓迫組大鼠運動功能在術(shù)后第一周即

6、迅速降低，后兩周繼續(xù)緩慢降低；薄膜包裹組第一周評分下降幅度較緩和，壓迫隨時間延長，BBB評分持續(xù)下降。TUNEL法檢測脊髓組織中細胞凋亡情況結(jié)果表明，直接壓迫組標本中的凋亡陽性細胞數(shù)目明顯多于薄膜包裹組標本中的凋亡細胞數(shù)目。Western Blot蛋白電泳結(jié)果也可見直接壓迫組與薄膜包裹組相比凋亡蛋白Caspase-3表達量更多。
　　結(jié)論：
　　聚乙烯醇水凝膠植入法是一個較為理想的脊髓壓迫動物模型的建立方法。術(shù)后改良Rivl