胃炎Ⅰ號對萎縮性胃炎大鼠胃黏膜NF-κB-HIF-1α通路的調(diào)控研究.pdf

1、背景:胃癌是常見惡性腫瘤之一，尤其在東亞地區(qū)具有較高的發(fā)病率。大量的流行病學研究顯示，慢性萎縮性胃炎及癌前病變與胃癌具有相關性。因此，預防或治療萎縮性胃炎及癌前病變，對降低胃癌的發(fā)病率、死亡率具有重要的意義。目前慢性萎縮性胃炎的西醫(yī)治療主要是對癥治療，中草藥治療萎縮性胃炎具有較為顯著療效，這也是當前研究的熱點。
　　眾所周知，炎癥反應、免疫紊亂、局部缺氧及血管增生等可能是胃癌發(fā)生的重要病理因素。大量研究觀察到萎縮性胃炎的患者的胃粘

2、膜可能促進許多細胞因子釋放，進而激活核因子κB(NF-κ B)信號。因此，胃癌中NF-κB信號的高度活性狀態(tài)可能在其中扮演重要的角色，即NF-κB高度激活具有“促瘤性”作用。另外，胃粘膜局部缺氧和血管增生是胃癌中常見病理狀態(tài)，低氧/缺氧是促進血管生成所必需的重要因素之一，缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是其中重要生物標志物。研究證實，NF-κB、HIF-1α、VEGF的異常激活是胃癌發(fā)生進展的重要標志，并

3、且是胃癌治療中的潛在靶點。但是，萎縮性胃炎中是否存在NF-κB、HIF-1α、VEGF異常表達以及中藥的治療效應則較少報道。
　　目的:
　　1.觀察胃炎Ⅰ號對萎縮性胃炎大鼠一般行為學的影響
　　2.觀察胃炎Ⅰ號對萎縮性胃炎大鼠胃黏膜組織病理學的影響;
　　3.觀察胃炎Ⅰ號對萎縮性胃炎大鼠胃黏膜NF-κ Bp65 mRNA、NF-κ Bp65蛋白、HIF-1α蛋白、VEGF蛋白表達的影響;
　　方法:將大鼠

4、隨機分為空白對照組(n=10)，模型組(n=10)，維酶素組(n=13)，胃炎Ⅰ號組(n=13)?？瞻讓φ战M常規(guī)喂養(yǎng)，其他組參考MNNG飲用液自由飲用法配合饑飽失常加瀉下耗氣法造模，復制GPL大鼠模型，連續(xù)18周。第9周開始灌胃，空白組與模型組大鼠灌胃蒸餾水，用藥組予相應藥物灌胃共10周。18周末，取胃粘膜上皮，在光學顯微鏡下觀察各組大鼠胃黏膜上皮的病理組織結構（蘇木精-伊紅染色，HE染色）;熒光定量逆轉錄PCR法(RT-PCR)法測定

5、胃黏膜上皮NF-κ Bp65 mRNA表達，免疫組化法檢測胃黏膜上皮NF-κ Bp65蛋白、HIF1-α蛋白及VEGF蛋白的表達。
　　結果:
　　1.空白組大鼠一般情況正常，精神狀態(tài)良好、靈活喜動、發(fā)育正常、皮毛光澤、飲食正常;模型組大鼠精神狀態(tài)萎靡，自主活動減少，發(fā)育遲緩，體重顯著不及空白組大鼠，毛發(fā)凌亂且光澤度差，飲食飲水減少，大便溏薄或腹瀉;維酶素組及胃炎Ⅰ號組大鼠在精神萎靡、活動減少、發(fā)育遲緩、體重減輕、飲食減少、

6、大便溏稀等表現(xiàn)均有不同程度改變。
　　2.HE染色結果顯示，空白組大鼠胃粘膜組織未見任何病理性改變，腺體結構、細胞形態(tài)等均正常。模型組大鼠胃粘膜組織上皮可見中-重度的不典型增生改變，某些腺體結構甚至類似于結腸的腺瘤性息肉改變。腺體結構顯著不完整、排列擁擠、邊界不清楚;腺腔內(nèi)可見形狀不一的異形細胞，細胞核深染，呈雪茄樣改變，可見細胞核假復層改變，細胞核極性減弱。嚴重病變者，可見異形細胞擴展到表面上皮，中重度異型增生的腺腔結構形狀不規(guī)

7、則，往往表現(xiàn)出分支和折疊，并?？梢娂毎藰O性消失。細胞核形狀不規(guī)則，可見增厚的細胞膜和突出的核仁，核分裂現(xiàn)象常見。維酶素組大鼠胃粘膜組織上皮可見中度的不典型增生改變，較模型組改變不明顯。胃炎Ⅰ號各劑量組大鼠胃粘膜組織上皮可見輕度的不典型增生改變，較模型組明顯改善。具體表現(xiàn)為:腺體結構輕度改變、排列稍紊亂、邊界欠清晰;腺腔內(nèi)形態(tài)稍欠規(guī)則的細胞，細胞核染色不深，大小相對較均一，核漿比例略失調(diào)，細胞核極性減弱，但細胞核僅限于基底層1/2內(nèi)。未

8、見異形細胞擴展到表面上皮。細胞核形狀不規(guī)則，核膜輕度增厚，可見突出的核仁，但核分裂現(xiàn)象僅見于胃粘膜上皮基底側。
　　3.各組大鼠大鼠胃黏膜NF-κ Bp65 mRNA、NF-κ Bp65蛋白、HIF-1α蛋白、VEGF蛋白表達
　　模型組大鼠胃粘膜上皮細胞的NF-KBp65 mRNA、NF-κ Bp65蛋白、HIF-1α蛋白、VEGF蛋白的表達顯著增強，與空白對照組相比差異具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　與模型組及維霉素相比

9、，胃炎Ⅰ號各劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的NF-K Bp65mRNA表達均顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)計學意義。與模型組相比，胃炎Ⅰ號各劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的NF-KBp65蛋白表達均顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)計學意義;與維酶素組相比，胃炎Ⅰ號高劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的NF-KBp65蛋白表達顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　與模型組相比，胃炎Ⅰ號高劑量及低劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的HIF-1α蛋白表達均顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)

10、計學意義。
　　與模型組相比，胃炎Ⅰ號各劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的VEGF蛋白表達均顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)計學意義;與胃炎Ⅰ號低劑量組相比，胃炎Ⅰ號高劑量組大鼠胃粘膜上皮細胞的VEGF蛋白表達顯著下降，差異具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1.健脾活血解毒復方胃炎Ⅰ號不僅能有效改善萎縮性胃炎胃癌前病變大鼠的脾虛癥狀，更能在一定程度上萎縮性胃炎胃癌前病變大鼠胃黏膜腺體萎縮、腸上皮化生、不典型增生等異常組織病理學狀態(tài)

11、，可防止萎縮性胃炎胃癌前病變進一步發(fā)展為侵襲性胃癌。
　　2.本次研究發(fā)現(xiàn)萎縮性胃炎大鼠的胃粘膜細胞的NF-KBp65活性增強，HE染色也發(fā)現(xiàn)萎縮性胃炎大鼠的胃粘膜可見細胞間質充血、水腫，淋巴細胞浸潤，這說明萎縮性胃炎大鼠的胃粘膜存在慢性炎癥性改變，并可能與NF-KBp65活性增強有關。另外，在光鏡下還發(fā)現(xiàn)胃粘膜血管的管腔明顯狹窄，甚至出現(xiàn)管腔閉塞現(xiàn)象，或發(fā)現(xiàn)局灶性血管“密集”分布現(xiàn)象，腺體結構失調(diào)的嚴重程度與血管異常程度呈正相關