體外重建人工紅細胞膜蛋白的免疫熒光法研究及其功能特性分析.pdf

1、傳統(tǒng)的輸血法不能完全解決臨床醫(yī)療和戰(zhàn)場急救等情況下存在的一些實際問題，血液代用品的研究應運而生。發(fā)展至今，人們已經(jīng)研制出三代血液的代用品，其中，以第三代人工構建的紅細胞與天然紅細胞在結構、性質(zhì)上更為接近，有趨于天然紅細胞的攜氧-釋氧能力。
　　 本課題對基于細胞骨架重建的紅細胞其蛋白結構、力學性質(zhì)及攜氧能力進行研究的基礎上重點利用免疫學方法對紅細胞構建過程中的膜蛋白進行定位示蹤，從微觀角度提供了體外重構紅細胞的可行性的直觀證據(jù)，

2、同時也為人工紅細胞的結構研究提供了新的途徑。
　　 目的：研究人工紅細胞功能及性質(zhì)，并且建立免疫技術對體外重建紅細胞膜結構蛋白研究的方法學，為血液代用品的研究提供新的參考。
　　 方法：制備人工紅細胞，觀測其氧飽和-解離曲線（P50）和粘彈性等參量，分析所得人工紅細胞的攜氧能力及其理化性質(zhì)，并通過免疫熒光的手段，實現(xiàn)對重建人工紅細胞膜蛋白的原位標記，以獲得膜蛋白的結構和分布。
　　 結果：本課題所制得的人工紅細胞

3、彈性和表體比均接近于天然紅細胞，其數(shù)值在天然紅細胞的范圍內(nèi)。通過氧親和力的測定，得到天然紅細胞的P50 為26.93，樣品人工紅細胞P50 值為15.67，數(shù)值上略有差異，說明了人工紅細胞的氧親和力優(yōu)于天然紅細胞。從熒光免疫結果來看，以熒光標記兔抗人免疫球蛋白為抗體，采用間接免疫熒光染色法對紅細胞膜蛋白spectrin al 原位標記，在激光共聚焦顯微鏡下以488nm 藍光激發(fā)熒光，通過對比天然紅細胞和人工紅細胞的spectrin 分布

4、，分析人工紅細胞的構象和重建的過程。與天然紅細胞類似，人工紅細胞在膜上有血影蛋白分布，且較天然紅細胞更為均勻。
　　 結論：在形態(tài)上，重建人工紅細胞類似于天然紅細胞，形態(tài)結構上的性質(zhì)與其生物力學和攜氧-釋氧的功能密切相關。細胞穩(wěn)定性測試結果顯示，人工紅細胞能夠以穩(wěn)定結構存在，并且保持良好的生理生化指標，通過對其膜蛋白特異熒光定位分析，可以看出人工紅細胞和天然紅細胞一樣在膜上分布有特定結構蛋白，說明在細胞體外重建的過程中，膜蛋白根