超聲聯(lián)合聲諾維微泡介導(dǎo)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤的40％-60%。由于其侵襲特性及由低級別向高級別轉(zhuǎn)化的趨勢，使得手術(shù)治療難以根治腫瘤，且放療和化療效果不佳，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差，死亡率高。而癌基因、抑癌基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，其中原癌基因的激活與抑癌基因的失活使其對細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)失控。野生型p53（wtp53）作為一種常見的抑癌基因，其主要生物學(xué)功能是通過一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及誘

2、導(dǎo)細(xì)胞凋亡來維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性，從而抑制腫瘤的發(fā)生。本文旨在探討超聲靶向破壞微泡（UTMD）技術(shù)增強(qiáng)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的可行性，同時(shí)對該轉(zhuǎn)染體系的微泡濃度、質(zhì)粒濃度等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。
　　方法：
　　將體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞懸液分為空白對照組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡組、超聲+微泡組、質(zhì)粒+超聲+微泡組；并將質(zhì)粒+超聲+微泡組按微泡濃度分為5%、10%、20%、30%、40%；再按質(zhì)粒濃度分為5μg/m

3、l、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。輻照條件：采用頻率1MHz、聲強(qiáng)0.8W/cm2、占空比20%、持續(xù)時(shí)間50s。在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h-48h，用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染率、臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞存活率、逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中的wtp53mRNA表達(dá)量、流式細(xì)胞儀檢測C6細(xì)胞凋亡百分比及細(xì)胞周期分布。
　　結(jié)果：
　　1、微泡濃度為20%、30%時(shí)，細(xì)胞

4、轉(zhuǎn)染效率較高，但微泡濃度為30%的C6細(xì)胞存活率比微泡濃度為20%的降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　質(zhì)粒濃度為15μg/ml時(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高（P<0.05），而C6細(xì)胞存活率有所下降（P<0.05）；質(zhì)粒濃度為20μg/ml、30μg/ml時(shí)細(xì)胞存活率顯著下降（P<0.01）。
　　因此，微泡濃度20%、質(zhì)粒濃度15μg/ml為該轉(zhuǎn)染體系最佳參數(shù)。
　　2、UTMD作為一種安全有效的轉(zhuǎn)染方法，目的基因可

5、以在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)，并發(fā)揮其相關(guān)效應(yīng)。
　　超聲+微泡組的細(xì)胞存活率與其他組相比（除質(zhì)粒+超聲+微泡組），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　與其他組比較，質(zhì)粒+超聲+微泡組細(xì)胞存活率的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；質(zhì)粒+微泡+超聲組的轉(zhuǎn)染效率最高，轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的wtp53mRNA的表達(dá)量增多，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡百分比明顯增高，細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞數(shù)增多（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　UTMD可