microRNAs調控口腔鱗癌增殖及凋亡的實驗研究.pdf

1、背景和目的：從全球范圍看，相對于全身其他部位的惡性腫瘤來說，頭頸部鱗癌惡性腫瘤的發(fā)生率較高，位列第6，每年有大約50萬的新發(fā)病例，并且造成20萬人的死亡。據(jù)統(tǒng)計，頭頸部惡性腫瘤的發(fā)病率為20.6/10萬，其中以口腔癌發(fā)病率最高，最常見病理類型為鱗狀細胞癌，占比約90％。microRNAs（miRNAs）是19-23個堿基大小的RNA序列，廣泛存在于動植物、甚至細菌中，雖然不編碼蛋白質，卻能對細胞的生理及病理過程能起到重要的作用。腫瘤的發(fā)

2、生是基因突變的結果，其的形成及發(fā)展過程中伴隨著多種miRNAs的異常表達，這種異常表達隨著腫瘤部位及組織及病理特征的不同而變化。為了更深入的認識miRNAs在口腔鱗狀細胞癌中所發(fā)揮的作用，本研究對影響調控口腔鱗癌細胞增殖及凋亡的miRNAs進行了篩選、鑒定并進一步實驗驗證其具體作用機制。
　　方法：我們對選取的8對口腔鱗癌及其癌旁正常組織進行miRNA芯片分析篩選口腔鱗癌組織中差異化表達的 miRNAs；在臨床樣本及口腔鱗癌細胞系

3、中利用real-timePCR的方法進行差異性驗證，通過體外細胞實驗的方法對篩選出的差異化miRNAs進行基因功能的檢測；我們進行了體外細胞增殖實驗（CCK8實驗）、單細胞平板克隆實驗、凋亡實驗以及細胞周期檢測，以評估篩選出的miRNAs對口腔鱗癌細胞的增殖及凋亡的影響。通過生物信息學網(wǎng)站的分析預測以及雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)尋找并驗證其相關靶基因；應用轉錄本拷貝數(shù)檢測及免疫印跡法(Western blot)驗證miRNAs對相應靶基因在

4、mRNA及蛋白質水平的調控作用。
　　結果：miR-330-3p在29對口腔鱗癌患者臨床組織樣本（每對樣本包括口腔鱗癌組織以及其癌旁正常組織）中的表達為：癌旁組織中miR-330-3p的表達量（10-3×U6）為7.476±3.537，口腔鱗癌組織表達量為13.059±5.045（t=5.282，n=29， P<0.0001），兩組對比具有統(tǒng)計學意義；miR-330-3p在增殖能力較弱的HN4及HN6細胞系中表達水平較低，而在高增

5、殖能力的 HN13及 SCC25中表達水平較高；miR-330-3p過表達能明顯提高癌細胞的增殖及單細胞克隆形成能力，并且顯著降低口腔鱗癌細胞的凋亡率；深入研究發(fā)現(xiàn)，miR-330-3p能夠在mRNA及蛋白質水平上負向調節(jié)靶基因程序性細胞凋亡因子4（PDCD4）的表達，降低鱗癌細胞的凋亡率，從而間接促進了腫瘤細胞的增殖能力。
　　結論：miR-330-3p在口腔鱗癌細胞中表達顯著高于癌旁正常組織，并且與患者預后呈現(xiàn)負相關；miR-