嬰兒雙歧桿菌對(duì)腸易激綜合征小鼠腸道黏膜肥大細(xì)胞上CRF受體表達(dá)及腸黏膜屏障功能的影響.pdf

1、背景和目的：
　　腸易激綜合征是一種常見但病因尚未明確的功能性胃腸道疾病。其病因很復(fù)雜，目前多數(shù)研究者認(rèn)為應(yīng)激、腦-腸軸的功能紊亂、腸道屏障功能障礙和局部黏膜免疫應(yīng)答異常參與腸易激綜合征的發(fā)病。在多種動(dòng)物模型及人類組織中發(fā)現(xiàn)應(yīng)激可通過(guò)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF，腦-腸軸中重要的效應(yīng)因子）介導(dǎo)腸屏障功能紊亂。研究表明，CRF通過(guò)激活肥大細(xì)胞發(fā)揮作用，肥大細(xì)胞激活后脫顆粒釋放多種促炎介質(zhì)如組胺、類胰蛋白酶、腫瘤壞死因子-α等進(jìn)而

2、影響腸道上皮屏障功能。然而，CRF激活肥大細(xì)胞及通過(guò)肥大細(xì)胞引起腸道屏障功能障礙的機(jī)制目前尚未完全闡明。
　　此外，一系列研究已經(jīng)表明腸道菌群與腦-腸軸之間存在著雙向互動(dòng)即微生物-腦-腸軸。而且應(yīng)用益生菌可以增強(qiáng)腸道黏膜屏障功能并調(diào)節(jié)腸道炎癥反應(yīng)。然而，在腸易激綜合癥中，腸道微生物如何影響腦-腸軸發(fā)揮作用目前也尚未明確。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察IBS小鼠模型結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞上CRF-R1、CRF-R2的表達(dá)情況，外周血中組胺、類

3、胰蛋白酶及TNF-α的表達(dá)及結(jié)腸黏膜CRF、PAR-2、Claudin1-4的表達(dá)變化；并應(yīng)用嬰兒雙歧桿菌對(duì)IBS小鼠進(jìn)行干預(yù)，探討并闡明IBS中應(yīng)激通過(guò)肥大細(xì)胞引起腸道屏障功能障礙的可能機(jī)制并觀察嬰兒雙歧桿菌的調(diào)節(jié)作用。
　　材料和方法：
　　30只雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及嬰兒雙歧桿菌組。以束縛應(yīng)激法建立 IBS小鼠模型。嬰兒雙歧桿菌組給予嬰兒雙歧桿菌灌胃，而對(duì)照組及模型組給予等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)1

4、4天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢測(cè)各組小鼠排便時(shí)間、糞便含水量并觀測(cè)腹肌收縮反射（AWR）后處死小鼠，留取各組小鼠血清、結(jié)腸組織。ELISA檢測(cè)外周血中組胺、類胰蛋白酶及TNF-α的表達(dá)變化。免疫組織化學(xué)分析結(jié)腸黏膜CRF、PAR-2、Claudin1、Claudin2、Claudin3、Claudin4的表達(dá)情況。免疫熒光雙標(biāo)分析結(jié)腸黏膜CRF-R1及CRF-R2在肥大細(xì)胞的表達(dá)情況。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)腸CRF-R1mRNA、CRF-R2mRN

5、A的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.造模后模型組小鼠較對(duì)照組體重降低，排便時(shí)間縮短，糞便含水量增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組小鼠較模型組體重增加，排便時(shí)間延長(zhǎng)，糞便含水量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在CRD擴(kuò)張壓力分別為20mmHg、40mmHg、60mmHg時(shí)，模型組和嬰兒雙歧桿菌組小鼠較對(duì)照組AWR評(píng)分明顯增高(P<0.05)，在各壓力時(shí)嬰兒雙歧桿菌組與模型組相比，AWR評(píng)分明顯降

6、低(P<0.05)。在CRD擴(kuò)張壓力為80mmHg時(shí)，三組小鼠的AWR評(píng)分無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　2.與對(duì)照組相比，模型組組胺、類胰蛋白酶及 TNF-α表達(dá)量明顯增高(P<0.05)，而嬰兒雙歧桿菌組組胺、類胰蛋白酶及TNF-α表達(dá)量較模型組明顯降低(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組組胺表達(dá)量較對(duì)照組明顯增加(P=0.011)，而類胰蛋白酶及TNF-α表達(dá)量較對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　3.與對(duì)照組相比，

7、模型組結(jié)腸黏膜 CRF、PAR-2、Claudin2表達(dá)量增加， Claudin1、Claudin3、Claudin4表達(dá)量降低(P<0.05)；而嬰兒雙歧桿菌組較模型組結(jié)腸黏膜 CRF、PAR-2、Claudin2表達(dá)量降低， Claudin1、Claudin3、Claudin4表達(dá)量增高(P<0.05)。
　　4.模型組 CRF-R1+肥大細(xì)胞及 CRF-R2+肥大細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯增高(P<0.05)；而嬰兒雙歧桿菌組 C

8、RF-R1+肥大細(xì)胞及 CRF-R2+肥大細(xì)胞數(shù)目較模型組明顯降低(P<0.05)。
　　5.模型組結(jié)腸CRF-R1 mRNA及CRF-R2 mRNA表達(dá)量較對(duì)照組明顯增高(P<0.05)；嬰兒雙歧桿菌組結(jié)腸CRF-R1 mRNA及CRF-R2 mRNA表達(dá)量較對(duì)模型組明顯降低(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組CRF-R1mRNA較對(duì)照組無(wú)顯著差異（P=0.438），嬰兒雙歧桿菌組CRF-R2 mRNA較對(duì)照組明顯升高(P<0.05

9、)。
　　結(jié)論：
　　1.束縛應(yīng)激法能夠成功誘導(dǎo)腹瀉型小鼠 IBS模型，嬰兒雙歧桿菌干預(yù)可減輕IBS小鼠的內(nèi)臟高敏感性。
　　2.在IBS小鼠模型中，應(yīng)激可能通過(guò)引起結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞上CRF-R1和CRF-R2的表達(dá)增高進(jìn)而引起肥大細(xì)胞的激活及其免疫因子釋放的增加，最終導(dǎo)致腸黏膜屏障功能障礙。
　　3.應(yīng)用嬰兒雙歧桿菌可同時(shí)下調(diào) IBS模型小鼠結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞上CRF-R1及CRF-R2的表達(dá)、減少IBS小鼠結(jié)腸