活血化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠的干預(yù)作用及對(duì)AT2R的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic kindey disease，DKD)是糖尿病(diabetesmellitus，DM)最常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，是引起終末期腎病(endstage renal disease，ESRD)的主要原因。因此探索DKD的發(fā)病機(jī)制及有效的治療方法是有重要意義的?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，DKD的發(fā)病影響因素有很多，其中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)的過(guò)度激活最為重要

2、。基于對(duì)RAS經(jīng)典途徑ACE-AngⅡ-AT1通路過(guò)度激活的認(rèn)識(shí)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI)、血管緊張素受體拮抗劑（angiotensin receptor blocker，ARB）已成為臨床治療DKD的基礎(chǔ)用藥。而中醫(yī)藥治療DKD也有著較好的臨床效果，為治療DKD提供了新的治療方法。本實(shí)驗(yàn)以高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin

3、，STZ)造模，并予活血化瘀通絡(luò)中藥和厄貝沙坦進(jìn)行干預(yù)，探討活血化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對(duì)AT2R的影響，為臨床治療糖尿病腎病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:健康雄性SD大鼠50只，體重在60-80g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，測(cè)尿蛋白、尿糖及尿紅細(xì)胞全部陰性，隨機(jī)選取9只大鼠做為正常組(N)，剩余大鼠予高脂飼料喂養(yǎng)4周，禁食12小時(shí)后，一次性腹腔注射STZ35mg/kg，72小時(shí)后測(cè)尾靜脈血糖≥16.7mmol/L為造模成功

4、。造模成功后將成模大鼠隨機(jī)分為模型組(M)，中藥組(ZY)，厄貝沙坦組(I)，成模4周后給予相應(yīng)藥物灌胃治療。連續(xù)給藥16周，留取0周（造模成模），造模成功4周，給藥16周的24小時(shí)尿液。于給藥16周末，大鼠禁食12小時(shí)后，在麻醉狀態(tài)下，留取血液，行生化、血凝指標(biāo)檢測(cè)，取右腎稱重，切取右腎組織以行光鏡、電鏡、免疫組化檢測(cè)，切取左腎皮質(zhì)行RT-PCR檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1、一般情況的比較
　　正常組大鼠一般狀態(tài)良好。

5、與正常組大鼠相比，模型組大鼠出現(xiàn)了明顯的多飲、多食、多尿、消瘦的癥狀，在注射STZ第7周后開(kāi)始出現(xiàn)潰瘍、白內(nèi)障、頜下包塊等并發(fā)癥。與模型組相比，兩治療組大鼠的一般情況好轉(zhuǎn)。
　　2、體重及腎臟肥大指數(shù)的比較
　　與正常組相比，模型組體重明顯減輕，腎臟肥大指數(shù)明顯升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，模型組與兩治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、24小時(shí)尿蛋白定量
　　在0周（造模成功后），各組間24小時(shí)

6、尿蛋白定量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);在給藥第4周末，與正常組相比，所有成模組24小時(shí)尿蛋白定量明顯增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在給藥第16周末，與正常組相比，模型組24小時(shí)尿蛋白定量明顯增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與模型組相比，兩治療組24小時(shí)尿蛋白定量明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、血凝
　　與正常組相比，模型組血漿凝血酶原時(shí)間(PT)和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)

7、化比值(INR)明顯縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與模型組相比，中藥組的PT明顯延長(zhǎng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)兩治療組的INR無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5、生化指標(biāo)
　　隨機(jī)血糖:與正常組相比，模型組血糖水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，模型組與兩治療組之間，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　總蛋白(TP):與正常組相比，模型組TP水平均明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與模型組相比

8、，兩治療組TP明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　血脂:與正常組相比，模型組甘油三酯(TG)膽固醇(TC)水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與模型組相比，兩治療組TG水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療組TC水平有所下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，兩治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　腎功能:與正常組相比，模型組尿素氮(BUN)血肌酐

9、(Scr)水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與模型組相比，兩治療組BUN水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療組Scr水平略有降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，兩治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　6、腎組織形態(tài)學(xué)變化
　　6.1光鏡觀察
　　正常組大鼠:腎小球結(jié)構(gòu)完整清晰，無(wú)明顯肥大。模型組大鼠:腎小球的毛細(xì)血管球肥大，基底膜增厚，系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)變寬。與模型組相比，兩治療組的

10、大鼠腎小球都有不同程度的病理改變，病理改變較輕。
　　6.2電鏡觀察
　　正常組大鼠:腎小球毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)清晰完整，均勻無(wú)增厚，足突分布均勻，內(nèi)皮細(xì)胞、系膜區(qū)未見(jiàn)異常。模型組大鼠:腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，足突融合，系膜區(qū)擴(kuò)大，系膜基質(zhì)明顯增多。兩治療組大鼠:腎小球毛細(xì)血管基底膜稍增厚，足細(xì)胞足突部分融合，系膜基質(zhì)輕度增多。兩治療組之間差異不明顯。
　　7、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)AT2R在腎組織中表達(dá)量的變化。

11、>　　結(jié)果顯示:AT2R主要表達(dá)位于腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，血管的內(nèi)皮細(xì)胞。與正常組相比，模型組AT2R的表達(dá)量明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與模型組相比，兩治療組AT2R的表達(dá)量明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療之組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　8、RT-PCR檢測(cè)腎組織內(nèi)AT2RmRNA表達(dá)量的變化
　　結(jié)果顯示:與正常組相比，模型組AT2RmRNA表達(dá)水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與

12、模型組相比，兩治療組AT2RmRNA表達(dá)水平均明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、活血化瘀通絡(luò)中藥可以改善大鼠一般情況，減少糖尿病腎病大鼠尿蛋白的排泄，維持血漿內(nèi)蛋白的水平。
　　2、活血化瘀通絡(luò)中藥延長(zhǎng)血漿凝血酶原時(shí)間，改善血液的高凝狀態(tài)。
　　3、活血化瘀通絡(luò)中藥降低甘油三酯水平，改善脂代謝紊亂狀態(tài)。
　　4、活血化瘀通絡(luò)中藥降低尿素氮