乳腺癌不同表型循環(huán)腫瘤細胞的檢測及其臨床意義.pdf

1、背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，其作為一種全身性疾病，腫瘤發(fā)展早期即可發(fā)生遠處播散轉移，而復發(fā)轉移為導致乳腺癌患者死亡的主要原因。存在于外周血中的循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)，在乳腺癌的復發(fā)、轉移中起到重要作用。上皮間質轉化(EMT)可使部分腫瘤細胞上皮標志表達下調，間質標志表達上調，使之具有間質細胞特性，其在CTCs的產生、存活，并最終導致轉移灶的形成方面具有重要作用。CTCs依據(jù)其標志表達情況可分為上皮型CTCs、間質型CTCs及上

2、皮間質混合型CTCs，同時有部分CTCs(3個或3個以上)聚集成團，形成循環(huán)腫瘤細胞團(CTM)。基礎及動物實驗表明，間質型CTCs和CTM具有更強的轉移潛能。乳腺癌患者中各種類型CTCs比例及各類型與乳腺癌原發(fā)病理特征的關系尚不明確，本研究將對以上問題進行探討。
　　目的:研究乳腺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞的水平及各表型數(shù)目與乳腺癌原發(fā)腫瘤臨床病理特征的關系。
　　方法:71例乳腺癌患者及10例乳腺纖維腺瘤患者在首次住院時

3、抽取靜脈血10ml，首先紅細胞裂解液裂解紅細胞，免疫磁珠陰性分離法去除白細胞，之后聚碳酸酯膜截留循環(huán)腫瘤細胞，最后采用多重RNA原位雜交技術進行循環(huán)腫瘤細胞的檢測。用免疫組化法檢測乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子（HER-2）和Ki-67表達情況。研究CTCs乳腺癌CTCs水平及各表型計數(shù)與患者發(fā)病年齡、腫瘤分期、遠處轉移與否、ER、PR、HER-2、Ki-67狀態(tài)及乳腺癌分子分型的關系。
　　結

4、果:
　　1、共有71例浸潤性乳腺癌患者納入本研究，其中61例患者10ml外周血中檢出CTCs，總陽性率為85.9％(61/71)，各型CTCs中位數(shù)分別為:上皮型1個，間質型2個，上皮間質混合型2個;有1例乳腺癌轉移性乳腺癌患者檢測到1個由3個間質型CTCs組成的CTM。對照組10例乳腺纖維腺瘤患者均未檢出CTCs。
　　2、共有Ⅰ+Ⅱ期患者25例，Ⅲ期患者18例，2例Ⅳ期患者及26例復發(fā)轉移性乳腺癌患者（復發(fā)轉移組）納入

5、本研究，各期總檢出率分別為76％(16/25)、94.44％(17/18)、100％(28/28)。Ⅰ+Ⅱ期患者檢出CTCs中位計數(shù)分別為:上皮型1個，間質型0.5個，上皮間質混合型1個;Ⅲ期患者檢出CTCs中位計數(shù)分別為:上皮型1個，間質型3個，上皮間質混合型2個;復發(fā)轉移性乳腺癌組患者檢出CTCs中位計數(shù)分別為:上皮型1個，間質型3個，上皮間質混合型5.5個。各腫瘤分期組CTCs水平差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），各腫瘤分期組

6、間質型CTCs計數(shù)及上皮間質混合型CTCs計數(shù)也具有統(tǒng)計學差異（P*=0.002，P**＜0.001）。28例轉移性乳腺癌患者CTCs水平、間質型CTCs計數(shù)、上皮間質混合型CTCs計數(shù)高于非復發(fā)轉移性乳腺癌（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）患者，差異有統(tǒng)計學意義（P*＜0.001，P**=0.006，P***＜0.001）。
　　3、71例患者乳腺癌組織的免疫組化結果顯示:ER陽性47例，ER陰性24例;PR高表達（≥20％陽性）35例，PR患者

7、低表達（＜20％陽性或陰性）36例;HER-2陽性24例，HER-2陰性47例;Ki-67高表達（≥14％）60例，Ki-67低表達(＜14％)11例。ER陽性組與ER陰性組及PR高表達與PR低表達組CTCs計數(shù)水平差異有統(tǒng)計學意義（P*=0.007，P**=0.002），HER-2陽性組與HER-2陰性組及Ki-67高表達組及Ki-67低表達組CTCs計數(shù)水平差異沒有統(tǒng)計學意義(P*=0.115，P*=0.477)。
　　4、7

8、1例乳腺癌患者中，Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型和TNBC患者分別占8例(11.3％)、39例(55.0％)、11例(15.5％)、13例(18.3％)，其中Luminal B型中HER-2陽性型13例(18.3％)，HER-2陰性型26例(36.7％);不同分子分型的乳腺癌患者CTCs計數(shù)水平差異有統(tǒng)計學意義(P=0.049)，不同分子分型的乳腺癌患者間質型CTCs計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（P=0.002）

9、。HER-2過表達型及TNBC組患者CTCs水平及間質型CTCs計數(shù)高于Luminal A型及Luminal B型組患者。
　　結論:
　　1、本研究采用的免疫磁珠法及膜濾過法兩種方法聯(lián)合對CTCs進行富集，并利用多重雙色RNA-原位雜交技術檢測CTCs，可以對包括CTM在內的所有的CTCs進行分離，并進行全面分型，具有極高的靈敏性及特異性，具有較高的臨床應用價值。
　　2、CTCs水平與乳腺癌的臨床分期密切相關，分期