進展期胃癌患者術中腹腔脫落細胞及相關基因的研究.pdf

1、目的:研究進展期胃癌患者手術過程前、后腹腔灌洗液脫落細胞及其DNA異倍體的陽性率，探討其與癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白7(CK7)、基質金屬蛋白酶7(MMP7)等相關基因、臨床病理的關系以及手術對其的影響。
　　方法:選取前瞻性、多中心、開放、隨機對照Ⅲ期臨床試驗(NCT01516944)中132例直接手術的進展期胃癌患者，所有患者術前均行全腹平掃+增強CT等影像學檢查以排除遠處轉移，并經胃鏡咬檢6～8塊組織，病理診斷為胃腺癌，

2、且均未使用化療或放療。手術均擬行標準的D2根治術，如開腹后發(fā)現已有遠處轉移則視情況行姑息手術，手術全過程采用嚴格的無瘤操作。手術開始后探查腹腔，患者頭高腳低位，提起橫結腸系膜，用生理鹽水300～400ml(37℃)沖洗下腹部及Doglas窩，使用負壓吸引器直接將灌洗液吸入干凈的標本袋中，如有腹水則有直接抽出，收集300ml左右，此為手術過程前組標本;手術結束關腹前使用無菌蒸餾水(37℃)沖洗3次，共約10分鐘左右，負壓吸盡，再用生理鹽水

3、300～400ml(37℃)沖洗全腹腔，使用新的吸引器吸取灌洗液300ml左右，此為手術過程后組標本，兩次標本均行腹腔灌洗液細胞學(peritoneallavage cytology，PLC)檢查，并使用Feulgon染色，檢測其DNA倍體，倍體≥5c為異常，給出四張圖表報告，第一張圖橫軸為DNA含量，縱軸為細胞數量，正常值＜5c。第二張圖橫軸為DNA含量，縱軸為細胞核面積。第三張圖為DNA含量最高的前20個DNA倍體數值和圖像。最后一

4、張為數值最大的DNA倍體的鏡下圖像。報告結果為（陰性）未見DNA倍體異常細胞;（陽性）可見DNA倍體異常細胞。同時檢測CEA、CK7、MMP7，在玻片上觀察目標細胞（考慮為癌細胞且需除外炎細胞、組織細胞和增生間皮細胞等）。CEA和MMP7定位于細胞漿，胞質均勻狀著棕黃色判定為陽性，不著色為陰性;CK7定位于細胞質，著色判定為陽性，否則為陰性;所有標本均加做WT-1、Calretinin以排除間皮細胞。分析PLC和DNA異倍體陽性與各臨床

5、病理參數的關系以及手術對其的影響。
　　結果:
　　1、目前PLC被認為是檢測腹腔脫落癌細胞(exfoliated cancer cells，ECC)的金標準，操作方法簡便，但其敏感性較低。
　　2、132例胃癌患者中手術過程前組有24例PLC陽性(18.18％)，而異倍體陽性的有35例(26.52％)，具有統(tǒng)計學差異(P=0.001)，其敏感度為100％，特異度為89.81％。
　　3、手術過程前組的CEA、C

6、K7、MMP7的陽性率分別為27.27％、24.24％、25％;而手術過程后的CEA、CK7、MMP7的陽性率分別為15.15％、14.39％、12.88％。PLC陽性與CEA、CK7的陽性率存在差異(P＜0.05)，但DNA異倍體陽性與CEA、CK7、MMP7的陽性率無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　4、根治性的R0手術PLC的陽性率為12.07％，明顯低于根治性的R1或R2或姑息手術的62.5％(P＜0.05)。
　　

7、5、手術過程前腹腔灌洗液陽性與腫瘤最長徑、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、腫瘤分期、手術根治度有關(P＜0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、分化程度、Lauren分型、Borrmann分型無關(P＞0.05)。
　　6、手術全程采用嚴格的無瘤操作，經過關腹前大量蒸餾水沖洗后，手術過程后組的PLC陽性率為9.09％，比術前的18.18％有了明顯的下降，且兩者之間存在統(tǒng)計學差異（P=0.004）。24例手術過程前組PLC陽性的患者，有

8、14例手術過程后轉為陰性;但是，有兩例患者手術過程前組PLC為陰性（可見異型細胞，且DNA倍體均＞5c），而手術過程后變?yōu)榱岁栃裕?例患者手術過程前的PLC結果及有可能是假陰性，而術后的結果為真陽性;亦有可能是術中無瘤操作不當造成的醫(yī)源性的腫瘤細胞脫落。
　　結論:
　　1、PLC法目前仍是診斷ECC的金標準，但是其敏感度較低，陽性率不高，而DNA倍體及CEA、CK7、MMP7等相關基因的檢測結果陽性率比PLC高。