胰腺癌血漿診斷標志物譜的篩選及驗證.pdf

1、胰腺癌(pancreatic cancer，PC)是一種惡性程度很高的腫瘤，其發(fā)病率位列腫瘤發(fā)病率第十。由于早期發(fā)病缺乏明顯的癥狀，沒有較好的早期診斷工具難以早期發(fā)現(xiàn)，進展期患者沒有有效的治療方式使得胰腺癌的預后很差，五年生存率低于10％。當前胰腺癌常用的診斷標志物CA19-9對早期患者的診斷不夠穩(wěn)定，靈敏度和特異性均不夠理想。因此，為了提高胰腺癌患者的生存期急需發(fā)現(xiàn)新的診斷標志物。本課題的主要目的就是為胰腺癌尋找有價值的血漿診斷工具，

2、分析鑒定其診斷靈敏度和特異性為臨床應用奠定前期基礎(chǔ)。
　　本課題采用407例血漿標本（包括胰腺癌、慢性胰腺炎、正常對照、結(jié)直腸者、胃癌和肝癌），檢測了七個候選標志物和CA19-9的表達情況。七個候選標志物（miR-20A，miR-21，miR-25，miR-155，miR-196A，miR-210和巨噬細胞抑制因子-1（Macrophage Inhibitory Cytokine-1，MIC-1））均有報道在胰腺癌中的高表達，是可

3、能的診斷標志物。
　　本實驗設(shè)計包含一個訓練組、一個驗證組和一個獨立的雙盲實驗。訓練組的目的是從候選標志物中篩選特異的診斷標志物，并利用篩選出的標志物建立診斷標志物譜的聯(lián)合方程。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對照相比，所有候選標志物均在胰腺癌患者的血漿中高表達(P＜0.001)，但miR-155，miR-196A，miR-210在胰腺炎患者中亦高表達，與胰腺癌患者的表達水平無顯著性差異。只有miR-20A，miR-21，miR-25，MIC

4、-1和CA19-9在胰腺癌中高表達且可以區(qū)別胰腺癌和其他消化道腫瘤（包括結(jié)直腸癌、胃癌和肝癌），但miR-155，miR-196A，miR-210在其他消化道腫瘤也高表達，對胰腺癌無組織特異性。因此，miR-20A，miR-21，miR-25，MIC-1和CA19-9是在胰腺癌特異性上調(diào)表達的標志物，利用多因素logistic回歸分析我們建立2個包含多個標志物的診斷方程用于診斷胰腺癌，他們是:Index1=1.971×ln(MIC-1)

5、+1.795×ln(miR-21)+1.020×ln(CA19-9)-42.305;Index2=2.138×ln(MIC-1)+1.772×ln(miR-25)+1.125×ln(CA19-9)-45.006.兩個方程用于診斷胰腺癌的閾值均為0。
　　訓練組中，比較胰腺癌和所有非胰腺癌，Index1的曲線下面積(AUC)是0.968(95％CI，0.947-0.989)，Index2的AUC是0.967(95％CI，0.945-

6、0.989)，單獨CA19-9的AUC是0.895(95％CI，0.838-0.952)。Index1、Index2和CA19-9的靈敏度分別是0.895、0.895、0.816，特異度分別是0.909、0.915、0.933，準確度分別是0.904、0.908、0.892?？梢姸鄠€標志物的聯(lián)合應用能提高單一標志物的診斷靈敏度和準確度。
　　驗證組用于鑒定所選擇建立的聯(lián)合方程的診斷價值。驗證組中，Index1的AUC是0.933(

7、95％CI:0.874-0.992)，而Index2的AUC是0.921(95％CI:0.856-0.986)，CA19-9的AUC是0.793(95％CI，0.687-0.899)。Index1、Index2和CA19-9的靈敏度分別是0.892、0.838、0.649，特異度分別是0.913、0.925、0.913。從訓練組和驗證組的結(jié)果可見，兩個聯(lián)合方程的診斷靈敏度和準確度比單一標志物CA19-9好。
　　雙盲實驗用于分析所

8、篩選出的聯(lián)合方程的臨床應用可行性。在雙盲實驗中，兩個聯(lián)合方程與CA19-9的診斷靈敏度和特異度相同。
　　相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)多數(shù)標志物的表達水平與患者的臨床指標如性別、年齡、高血壓史、糖尿病史等均無相關(guān)性。Index1和Index2的表達水平與性別和糖尿病史有一定相關(guān)性，但相關(guān)系數(shù)很小。
　　隨訪了100例胰腺癌患者的生存狀態(tài)并分析候選標志物表達與胰腺癌預后之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6個miRNA、MIC-1、CA19-9和兩個聯(lián)