KGF-2抑制角膜損傷修復過程中疤痕的形成及其作用機制研究.pdf

1、目的：采用SD大鼠作為受試動物，采用堿燒傷構(gòu)建角膜損傷模型，用臨床藥物堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast growth factors，bFGF)作為陽性對照藥，與角質(zhì)細胞生長因子-2（Keratinocyte growth factor-2，KGF-2）進行比較，評價了KGF-2對角膜損傷的修復及抗瘢痕作用。另外，對于KGF-2如何調(diào)控角膜基質(zhì)細胞的損傷修復，如何減少角膜損傷修復過程中疤痕形成做了進一步的研究。<

2、br>　　方法：將受試藥物以生理鹽水配制成12500AU/50μg/ml;6250AU/25μg/ml;3125AU/12.5μg/ml三個規(guī)格。實驗動物為SPF級SD大鼠。堿燒傷大鼠隨機分成五組:模型對照組、bFGF組、KGF-2低劑量組、KGF-2中劑量組、KGF-2高劑量組。速眠新Ⅱ聯(lián)合3％戊巴比妥鈉麻醉實驗動物。使用直徑3 mm濾紙片浸于1mol/L NaOH溶液中來制作雙側(cè)角膜堿燒傷模型。造模后即刻起每日早、中、晚3次各組滴眼

3、給藥，2滴/次，連續(xù)14天。燒傷后每天觀察SD大鼠眼角膜損傷臨床表現(xiàn);分別于燒傷后1-d、3-d、7-d和14-d取角膜，進行裂隙燈顯微鏡觀察及角膜彩色照相，滴眼給藥后7-d和14-d取角膜進行病理組織學檢測。使用組織塊法提取原代的角膜基質(zhì)細胞;MTT方法檢測KGF-2促進角膜基質(zhì)細胞增殖作用。KGF-2促進角膜基質(zhì)細胞遷移的作用通過劃痕實驗來驗證。向培養(yǎng)的原代角膜基質(zhì)細胞中加入TGF-β1蛋白來誘導角膜肌成纖維細胞的形成，以此來模擬動

4、物模型中的角膜損傷，使用WB、細胞免疫熒光等方法來檢測角膜損傷修復及疤痕形成過程中相關蛋白的表達。
　　結(jié)果：眼部一般臨床表現(xiàn):大鼠角膜堿灼傷后，各組大鼠眼瞼、結(jié)膜均出現(xiàn)不同程度的充血、水腫，角膜均觀察到大量新生血管，各組大鼠角膜均有不同程度的渾濁，滴眼給予藥物后大鼠角膜渾濁程度較輕。角膜損傷程度觀察:與模型對照組相比，KGF-2中劑量組、高劑量組大鼠角膜在治療后第3天的角膜損傷程度評級具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05); KGF-2

5、低劑量組、中劑量組、高劑量組，bFGF組大鼠角膜在治療后第7天的角膜損傷程度評級具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05);各給藥組在治療后第1天、第14天角膜損傷程度評級均無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。上皮細胞愈合率:與對照組相比，KGF-2低劑量組、中劑量組大鼠角膜治療后第3天、7天的上皮細胞愈合率均顯著性增加，有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，KGF-2高劑量組大鼠角膜傷治療后第1天、3天、7天的上皮細胞愈合率顯著性增加(p＜0.05)，其余各組

6、各檢測時間點均未見統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。此外，與對照組相比KGF-2高劑量組大鼠角膜在治療后第3天、7天出現(xiàn)上皮細胞完全愈合的動物例數(shù)具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，其余各組大鼠角膜在各檢測時間點出現(xiàn)上皮細胞完全愈合的動物例數(shù)均無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。病理學觀察:給藥7天后，bFGF組，KGF-2低、中、高劑量組角膜病理組織結(jié)構(gòu)與對照組比較無顯著性差別;治療14天后，bFGF組，KGF-2低、中、高劑量組角膜厚度較模型對照組

7、顯著降低。KGF-2（20μg/ml）能明顯促進角膜基質(zhì)細胞的增殖和遷移作用。培養(yǎng)基中加入TGF-β1(1ng/ml)與對照組相比明顯增加了疤痕形成相關蛋白及受體(TGF-β1、TGF-β2、α-SMA、TGF-βR1及TGF-βR2)的表達，而加入TGF-β1的同時加入KGF-2，于僅僅加入TGF-β1相比明顯減少了上述指標的表達。此外，僅僅加入KGF-2幾乎完全抑制了上述指標的表達。
　　結(jié)論：在本試驗條件下，KGF-2在12