rhg-CSF對CD4+T細(xì)胞功能調(diào)控的分子機(jī)制.pdf

1、目的:重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)是外周血造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)中最常用的動(dòng)員劑，它能促使造血干細(xì)胞從骨髓釋放到外周。研究證明rhG-CSF動(dòng)員后供者外周血T細(xì)胞的數(shù)量和功能均發(fā)生了變化。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)rhG-CSF動(dòng)員后CD4+T細(xì)胞表面的淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)的表達(dá)量沒有發(fā)生變化，而其對細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)的黏附能力下降，這就提示在動(dòng)員過程中G-CSF可能抑制了LF

2、A-1/ICMA-1信號(hào)通路。LFA-1/ICAM-1信號(hào)通路不僅能影響T細(xì)胞的黏附，還能影響T細(xì)胞的極化和遷移功能。本課題組前期研究已經(jīng)證實(shí)體內(nèi)rhG-CSF動(dòng)員后CD4+T細(xì)胞的黏附，極化以及遷移能力均受到抑制，本研究旨在觀察體外rhG-CSF刺激通過LFA-1/ICAM-1信號(hào)途徑對CD4+T細(xì)胞黏附和極化功能的影響以及rhG-CSF對LFA-1/ICAM-1信號(hào)通路的影響。
　　方法與結(jié)果:
　　(1)采集12例健康

3、志愿者的外周血10ml，密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，使用免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測分選后CD4+T淋巴細(xì)胞的純度為（96.1±1.6）％;均在95％以上，200ng/ml rhG-CSF體外刺激CD4+T細(xì)胞24h。
　　(2)使用酶標(biāo)儀檢測CD4+T細(xì)胞接受基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α(SDF-1α）和ICAM-1信號(hào)刺激后細(xì)胞的黏附能力。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組（體外rhG-CSF刺激后的健康志愿者）CD4+T細(xì)胞的黏附比例

4、為（61.9±5.9）％，對照組（健康志愿者）為（68.3±7.3）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)使用倒置顯微鏡檢測CD4+T細(xì)胞接受SDF-1α和ICAM-1信號(hào)刺激后細(xì)胞的極化能力。實(shí)驗(yàn)組（體外rhG-CSF刺激后的健康志愿者）CD4+T細(xì)胞的極化比例為(24.3±4.3)％，對照組（健康志愿者）為（47.1±5.1）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(4)使用western blot檢測rhG-CSF動(dòng)員后CD4+T細(xì)胞

5、接受SDF-1α和ICAM-1信號(hào)刺激后LFA-1/ICAM-1信號(hào)途徑中ZAP-70以及PLCγ-1蛋白的表達(dá)情況變化。結(jié)果顯示rhG-CSF動(dòng)員后供者CD4+T細(xì)胞中磷酸化的ZAP-70以及磷酸化的PLCγ-1表達(dá)水平降低。
　　結(jié)論:體外rhG-CSF刺激能通過LFA-1/ICAM-1信號(hào)途徑抑制外周血CD4+T細(xì)胞的黏附和極化功能;rhG-CSF動(dòng)員可通過調(diào)控LFA-1/ICAM-1信號(hào)途徑中蛋白激酶ZAP-70以及PLC