大鼠骨髓源神經(jīng)干細胞向血管內(nèi)皮細胞樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察SD大鼠骨髓源神經(jīng)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells,BMSCs-NSCs）在血管內(nèi)皮細胞（vascular endothelial cells,VEC）培養(yǎng)條件下是否分化為內(nèi)皮樣細胞（endothelial-like cells,ELCs）。
　　方法：
　　本實驗采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠雙側股骨、脛骨以

2、及肱骨的骨髓，利用骨髓源基質(zhì)干細胞（bonemarrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的貼壁生長特性和多次傳代培養(yǎng)使其純化。研究BMSCs的外形改變并繪制P3（Passage3）代細胞的生長曲線，探討B(tài)MSCs的最適接種密度，利用流式細胞儀檢測BMSCs標志物CD34、CD44、CD45、CD90的表達情況。將所得P3代BMSCs消化形成單細胞懸液，調(diào)整細胞密度后置于神經(jīng)干細胞(neural stem ce

3、lls，NSCs)誘導培養(yǎng)基（20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、B27）中進行懸浮培養(yǎng)，通過免疫細胞化學染色觀察神經(jīng)球表面標志物CD133、Nestin的表達情況。培養(yǎng)所得神經(jīng)球消化形成單細胞，并進行免疫細胞化學染色檢測VEC表面標志物CD31、vWF的表達情況。將所得NSCs懸液置于Matrigel膠質(zhì)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察是否形成血管腔樣結構。
　　結果：
　　1．BMSCs早期呈簇狀生長，細胞呈梭形。P3

4、BMSCs流式細胞儀檢測顯示CD44陽性細胞比率為91.4％，CD90陽性細胞比率為93.7%；CD34、CD45的表達均呈陰性反應。
　　2．P3代細胞生長曲線呈“S”型，其接種最佳密度區(qū)間在5×104~1×105/mL。
　　3．BMSCs培養(yǎng)1-2天時細胞聚集呈團塊狀，隨后呈“桑葚狀”球形結構，免疫細胞化學染色顯示CD133、Nestin的表達均呈陽性反應。
　　4．骨髓源神經(jīng)球在VEC培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天時，細胞呈