RNA干擾沉默TCF8對高糖和血管緊張素Ⅱ致足細胞間質轉換的研究.pdf

1、在腎臟，足細胞附著在腎小球基底膜外，其足突上多種分子相互交錯形成裂孔隔膜（slit diaphragm，SD），是腎小球濾過屏障的重要組成部分。足細胞在保護腎小球濾過屏障的完整性方面起著重要的作用。足細胞的功能與腎臟功能密切相關，其超微結構的變化或與功能相關的分子表達改變均與腎臟功能的損害有著密切的關系。一般來說，上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是極化上皮細胞發(fā)生許多生化變化，

2、以獲得間充質細胞表型。足細胞是上皮細胞，當受到不同的刺激（如TGF-β，高濃度的葡萄糖，血管緊張素Ⅱ，阿霉素等）時，有可發(fā)生EMT。當EMT的發(fā)生，上皮表型標志物如E-cadherin，P-cadherin，nephrin、podocalyxin，Synaptopodin的下調，與間質表型標志物如desmin，FSP-1，MMP-9，ILK，fibronectin，vimentin，α-SMA，Ⅰ型膠原及snai等上調。在受損的腎臟產生

3、腎間質纖維化中，EMT被認為是一個關鍵因素。足細胞EMT可引起腎小球濾過屏障的損傷和蛋白尿，嚴重者可導致足細胞由腎小球基底膜脫離和細胞凋亡，導致足細胞數量減少，從而加重蛋白尿和腎臟功能損傷甚至腎小球硬化。足細胞EMT是研究蛋白尿和腎臟纖維化發(fā)生發(fā)展的一個重要方面。研究目的:探討在高濃度的葡萄糖和血管緊張素Ⅱ存在下，足細胞的EMT以及TCF8在足細胞EMT中的影響。
　　方法:足細胞經分化后，經與血管緊張素Ⅱ和葡萄糖分別孵育，Wes

4、tern blotting方法檢測蛋白表達;Transwell小室檢測細胞的遷移和侵襲能力。qPCR方法檢測mRNA表達。
　　結果:
　　1.血管緊張素Ⅱ和高糖對正常足細胞E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和vimentin蛋白表達的影響
　　血管緊張素Ⅱ和葡萄糖可使足細胞上皮標志分子E-cadherin和α-catenin蛋白的表達逐漸降低，而足細胞間質標志分子N-cadherin和Vi

5、mentin表達均升高。
　　2.血管緊張素Ⅱ和高糖對正常足細胞TCF8蛋白表達的影響
　　足細胞經葡萄糖或血管緊張素Ⅱ孵育后，隨著葡萄糖或血管緊張素Ⅱ濃度的增加，TCF8蛋白的表達逐漸升高。
　　3.血管緊張素Ⅱ和高糖對正常足細胞遷移和侵襲能力
　　足細胞經葡萄糖或血管緊張素Ⅱ作用后，其遷移和侵襲能力有明顯增加。
　　4.TCF8 siRNA篩選
　　足細胞經TCF8基因沉默后，TCF8的表達明顯降

6、低，其中1＃siRNA的作用最強。
　　5.沉默TCF8基因對E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和vimentin蛋白表達的影響
　　未經轉染的細胞上皮標志物分子E-cadherin和α-catenin均有表達，而間質標志物分子N-cadherin和vimentin較低。經高糖或血管緊張素Ⅱ刺激后，E-cadherin和α-catenin表達降低，N-cadherin和vimentin表達增加。s

7、hTCF8＃1轉染細胞后，高濃度葡萄糖和血管緊張素Ⅱ均可使上皮細胞標志物E-cadherin和α-catenin表達增加，間質標志物分子N-cadherin和vimentin表達降低，表明TCF8表達沉默后，細胞不利于間質轉換，提示TCF8具有促進EMT作用。
　　6.沉默TCF8基因對足細胞遷移和侵襲能力
　　未經轉染的細胞經高糖或血管緊張素Ⅱ刺激后，細胞遷移和侵襲能力增加，TCF8基因沉默后，細胞遷移和侵襲能力降低。表明