熱補針法針刺對RA寒證模型家兔血液代謝物影響的實驗研究.pdf

1、目的：運用代謝組學的技術和方法，觀察熱補針法調節(jié)RA寒證模型家兔血液代謝物的表達變化，探討熱補針法治療RA的相對特異性機制。
　　方法：40只健康清潔級青紫藍家兔隨機分為正常組、模型組、平補平瀉組、捻轉補法組、熱補針法組，各8只。以卵蛋白誘導配合低溫冷凍法制備RA寒證模型，除正常組、模型組外，其余各組分別于雙側足三里穴施以平補平瀉法、捻轉補法與熱補針法針刺，1次/日，留針30min/次，共7次。觀察各組家兔一般狀況，測定痛閾、關節(jié)

2、腫脹度，觀察滑膜病理學改變、統(tǒng)計病理積分，制備血清，對血清進行液質聯(lián)用(LC-MS)技術檢測，對數(shù)據(jù)進行主成分分析（PCA）、偏最小二乘法－判別分析（PLS-DA），通過變量重要性投影值（VIP>1）和P值（P＜0.05）篩選出血清中的差異代謝物。
　　結果：
　　1.家兔一般狀況的變化
　　正常組家兔飲食、飲水、活動等均無任何異常改變；模型組家兔蜷縮，精神狀態(tài)較差，體毛雜亂、不光澤，活動量減少，飲食、飲水量均減少，膝

3、關節(jié)腫脹，觸之出現(xiàn)躲避行為，膝關節(jié)局部皮膚冰冷；各針刺組精神狀態(tài)、活動量、關節(jié)腫脹度等較模型組均明顯改善。
　　2.家兔痛閾值的變化
　　模型組家兔痛閾明顯低于正常組（P＜0.05）；各針刺組家兔痛閾均高于模型組（均P＜0.05）；熱補針法組家兔痛閾高于平補平瀉組和捻轉補法組（均P＜0.05）。
　　3.家兔膝關節(jié)周徑的變化
　　模型組家兔膝關節(jié)周徑大于正常組（P＜0.05）；各針刺組家兔膝關節(jié)周徑均小于模型組（

4、均P＜0.05）；熱補針法組膝關節(jié)周徑與平補平瀉組和捻轉補法組比較沒有顯著差異（均P＞0.05）。
　　4.家兔滑膜組織形態(tài)學和病理積分變化
　　正常組：滑膜細胞排列整齊，無增生腫大，未發(fā)現(xiàn)炎性細胞浸潤，滑膜基質無增殖。模型組：滑膜被覆細胞增生腫大嚴重，巨細胞、淋巴細胞常見，炎性細胞浸潤明顯，滑膜基質增生顯著。平補平瀉組和捻轉補法組：滑膜細胞增生較模型組減少，有少許巨細胞、淋巴細胞，炎性細胞中度浸潤，中度滑膜基質增生。熱補針

5、法組：滑膜被覆細胞增生腫大程度明顯減輕，罕見巨細胞，炎性細胞輕度浸潤，有輕度滑膜基質增生。
　　模型組家兔膝關節(jié)滑膜組織病理積分明顯高于正常組、平補平瀉組、捻轉補法組和熱補針法組（均P＜0.05）；各針刺組滑膜組織病理積分均顯著低于模型組（均P＜0.05）；熱補針法組滑膜組織病理積分明顯低于平補平瀉組和捻轉補法組（均P＜0.05）。
　　5.主成分分析（PCA）結果
　　從PCA得分圖中可以看出各組聚類明顯，說明五組樣

6、本有明顯差異，各針刺組有沿t[1]軸回歸正常組的趨勢，并且熱補針法組最明顯。
　　6.偏最小二乘法－判別分析（PLS-DA）結果
　　模型組家兔血液代謝物變化較正常組主要體現(xiàn)于肉堿、溶血性磷脂酰膽堿（LysoPC(14:0)）、LysoPC(18:3)、溶血性磷脂酰乙醇胺（LysoPE(0:0/20:5)）、LysoPE(0:0/22:1)、癸酸、硬脂酸以及乳酸的含量均升高，亮氨酸、纈氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、焦谷氨酸、α－酮

7、戊二酸、琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸、半乳糖、甘露糖的含量均降低，上述代謝物具體涉及到脂肪酸、氨基酸、三羧酸循環(huán)以及糖類代謝。各針刺組上述代謝物均出現(xiàn)回調，熱補針法組對RA寒證模型家兔三羧酸循環(huán)與糖代謝的回調作用均明顯優(yōu)于平補平瀉組和捻轉補法組。
　　結論：
　　1.熱補針法對RA寒證模型家兔具有相對特異性治療作用；
　　2.熱補針法能相對特異性改善RA寒證模型家兔的病理形態(tài)、降低滑膜組織病理積分；
　　3.熱補針法