大腸桿菌組成型合成丹參素及其分離.pdf

1、丹參素是一種重要的天然酚酸類(lèi)化合物，在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。目前丹參素主要來(lái)源于中藥丹參的根部，由于提取難度大和含量低制約了丹參素的應(yīng)用。發(fā)酵生產(chǎn)丹參素是一個(gè)重要的研究方向，本文研建組成型合成丹參素的大腸桿菌，并從發(fā)酵液中分離丹參素。
　　本文選用7種不同強(qiáng)度的lacUV5、trc、tac、gap、gaptb、p342和p46啟動(dòng)子來(lái)調(diào)控hpaBC和dldh兩個(gè)基因的表達(dá)，通過(guò)重疊延伸PCR和酶切連接技術(shù)構(gòu)建了13種

2、組合。利用λ-red同源重組將13種組合整合到BKT5的染色體上，得到13株重組大腸桿菌。搖瓶發(fā)酵結(jié)果表明，菌株BCL13的丹參素產(chǎn)量最高，達(dá)到618mg/L，BCL2的丹參素產(chǎn)量最低，僅僅為45mg/L。更改兩個(gè)基因的啟動(dòng)子，丹參素的產(chǎn)量變化了13倍。
　　通過(guò)對(duì)發(fā)酵液中丹參素的靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的吸附與解吸實(shí)驗(yàn)，得到了最佳的吸附和解吸條件以及最合適的大孔吸附樹(shù)脂類(lèi)型，并且用動(dòng)力學(xué)吸附曲線和等溫吸附曲線來(lái)描述樹(shù)脂對(duì)丹參素的吸附行為。最佳