Mfn2在子癇前期患者血清中的表達及Mfn2對JEG-3細胞侵襲能力的作用.pdf

1、背景：
　　子癇前期是妊娠期特有的疾病，其發(fā)病機制尚不明確，目前廣泛認同的發(fā)病機制為“兩階段學說”，其主要內容為滋養(yǎng)細胞浸潤功能障礙及子宮螺旋小動脈重鑄異常，致使胎盤缺血缺氧，引起子癇前期的發(fā)生[1]。線粒體融合蛋白2（Mfn2）是線粒體動力蛋白之一，定位于線粒體外膜，促進線粒體融合，參與線粒體的形態(tài)和功能調節(jié)、細胞能量代謝、信號轉導、增殖、凋亡等眾多細胞生物學過程[2,3]。已有研究發(fā)現(xiàn)線粒體融合蛋白2在子癇前期患者胎盤組織中表

2、達下降，并且線粒體融合蛋白-2在孕早期胚胎的發(fā)育中起著重要作用[4-6]。但線粒體融合蛋白-2在孕婦母體外周血清中的表達及對滋養(yǎng)細胞侵襲能力的影響尚不清楚。
　　目的：
　　了解線粒體融合蛋白-2在子癇前期母體外周血清及正常孕婦外周血清中的表達情況，研究線粒體融合蛋白-2低表達對絨毛膜癌滋養(yǎng)細胞JEG-3細胞侵襲能力的影響，進而探討線粒體融合蛋白-2在子癇前期中的作用機制。
　　方法：
　　1標本采集：收集子癇前

3、期、妊娠期高血壓及正常孕婦母體外周血，5000轉/分，離心5分鐘，將血清收集于1.5毫升EP管，-80度冰箱保存。
　　2使用Mfn2 ELISA試劑盒（優(yōu)爾生）檢測三組母體外周血清中線粒體融合蛋白-2水平。
　　3構建并篩選Mfn2低表達質粒。
　　4 JEG-3細胞培養(yǎng)及轉染：所有試驗中JEG-3細胞均分為3組培養(yǎng)，即空白對照組、轉染空質粒組、Mfn2低表達組。其中細胞培養(yǎng)使用DMEM培養(yǎng)基，血清濃度為10％，轉染

4、試劑為TIANGEN轉染試劑。
　　5檢測指標：（1）應用Western Blot方法檢測各處理組線粒體融合蛋白-2的表達情況；（2）通過MTT試驗檢查各組中JEG-3細胞的增殖能力；（3）通過劃痕試驗分析線粒體融合蛋白-2表達下降后JEG-3細胞的遷移運動能力；（4）通過Transwell試驗分析線粒體融合蛋白-2表達下降后JEG-3細胞的侵襲能力。
　　6通過SPSS18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結果

5、：
　　1收集的子癇前期患者血清標本20例，妊娠期高血壓患者血清標本18例，正常妊娠血清標本35例。所有患者的入選標準均根據(jù)ACOG標準，且滿足以下條件：孕周大于32周；單胎；非IVF-ET妊娠；年齡介于20-35歲；無其他妊娠合并癥。
　　2入選的三組間年齡構成：子癇前期組平均年齡為29.65±4.66歲，妊娠期高血壓組平均年齡為31.00±4.65歲，正常妊娠組平均年齡為29.11±3.55歲，各組在年齡構成上無統(tǒng)計學差

6、異，P>0.05。
　　3使用ELISA試劑盒對母體外周血清Mfn2蛋白檢測結果：子癇前期及妊娠期高血壓患者母體外周血清Mfn2蛋白表達水平較正常妊娠組母體外周血清水平升高，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05。但是子癇前期組與妊娠期高血壓組比較，線粒體融合蛋白-2在母體外周血清的表達水平?jīng)]有明顯差異，P>0.05。
　　4構建并篩選質粒結果：由吉凱基因公司構建3個Mfn2低表達質粒，并在其中篩選出干擾效果最優(yōu)的質粒為Mfn2RN

7、Ai19851。
　　5細胞實驗結果：將構建的質粒轉染JEG-3細胞后，線粒體融合蛋白-2低表達，提示成功構建線粒體融合蛋白-2低表達的細胞模型；在線粒體融合蛋白-2低表達組，JEG-3細胞的侵襲、遷移能力下降（P<0.05），但細胞增殖能力無明顯變化（P>0.05）。
　　結論：
　　1線粒體融合蛋白-2可能作為子癇前期早期篩查的標記物。
　　2線粒體融合蛋白-2可能通過影響滋養(yǎng)細胞的侵襲能力而參與子癇前期的發(fā)