二甲雙胍對人網(wǎng)膜脂肪細胞中v-SNAREs家族表達的影響.pdf

1、目的：
　　觀察二甲雙胍對人成熟脂肪細胞中囊泡相關可溶性N-乙?；鶃啺访舾幸蜃痈街鞍资荏w（vescical-souble N-ethymaleimide sensitive factor attachment proteins receptor, v-SNAREs）家族成員VAMP2、3、4、5、7、8表達的影響。
　　方法：
　　1.選擇擇期開腹手術病人，術中無菌條件切取腹部大網(wǎng)膜脂肪組織，采用膠原酶消化法分離前脂

2、肪細胞。于37℃、5％CO2條件下DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并誘導其分化為成熟脂肪細胞，用油紅O染色鑒定證實。
　　2.予不同濃度二甲雙胍（0mM，1mM，10mM）干預成熟脂肪細胞24h后，運用實時熒光相對定量PCR技術檢測細胞VAMP2、3、4、5、7、8mRNA的表達水平。
　　3.使用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，實驗數(shù)據(jù)用均值±標準差( x±s)表示，樣本間均數(shù)比較采用配對樣本T檢驗，以P<0.

3、05為差異有統(tǒng)計學意義
　　結果：
　　1.成功進行了人前脂肪細胞的原代培養(yǎng)，并誘導其分化為成熟脂肪細胞。
　　2.RT-PCR結果：與對照組（0mM二甲雙胍）相比，1mM二甲雙胍上調(diào)脂肪細胞VAMP4、5、8水平(分別P<0.05，P<0.05，P<0.05，)，下調(diào)VAMP3、7水平（分別P<0.05，P<0.01），VAMP2表達的差異無統(tǒng)計學意義；與對照組相比10mM二甲雙胍上調(diào)脂肪細胞VAMP4、5、8水平(

4、分別P<0.01，P<0.01，P<0.01)，下調(diào)VAMP7水平（P<0.01），VAMP2、3表達差異無統(tǒng)計學意義；10mM二甲雙胍干預組與1mM組比較， VAMP3、4、5、8表達水平升高（P<0.05，P<0.05，P<0.05，P<0.01）， VAMP2、7表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.使用膠原酶消化法分離并原代培養(yǎng)了人大網(wǎng)膜前脂肪細胞，并成功的誘導分化為成熟脂肪細胞，驗證了本實驗室建立的前脂肪細胞