蘇云金芽孢桿菌的cry1Ac31和cry39-like基因鑒定及功能的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本課題對32株蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)通過鏡檢、SDS-PAGE分析、PCR-RLFP、生物殺蟲活性測定等方法進行了Bt菌株蛋白和基因型的鑒定，結(jié)果表明，32株Bt菌株中，有25株含有cry1Ac基因，表達約130kDa的晶體蛋白，有1株可能含有cry39基因，表達約75kDa的晶體蛋白；另外有4株表達蛋白大小約為130kD和2株表達蛋白大小約為140kDa，其基因型尚不能確定，有待進一步分析

2、。選取其中6株進行生物測定表明，產(chǎn)菱形晶體含有cry1Ac基因的4株(S3299-1、S3136-1、S3225-1、S3276-1)對鱗翅目小菜夜蛾幼蟲有很強的殺蟲活性，產(chǎn)方形晶體菌株S3060-1對淡色庫蟻和白紋伊蚊有很好的毒殺活性。
　　 蘇云金芽孢桿菌S3299-1是從中國海南島吊羅山熱帶雨林區(qū)的土壤樣品中分離得到的，通過PCR-RFLP方法鑒定出該菌株含有cry1Ac基因，然后用PCR方法克隆基因完整的ORF序列，測序

3、表明該基因編碼區(qū)(ORF)為3537 bp，編碼1178個氨基酸，其分子量約為130kDa，等電點為5.03，為弱酸性蛋白。序列比較結(jié)果表明，該基因與cry1Ac類基因高度同源（同源性達99％），已在GeneBank中登錄，登錄號為：GU446674，被國際Bt毒素命名委員會命名為cry1Ac31。該基因插入表達載體pQE30Xa實現(xiàn)在大腸桿菌異源表達，SDS-PAGE分析表達cry1Ac31蛋白大小為130kDa，其表達蛋白對小菜蛾的

4、殺蟲活性LC50為2.204ng/ml。蘇云金芽孢桿菌S3060-1是從中國東北的黑龍江省涼水自然保護區(qū)土壤中分離出得到，經(jīng)PCR方法鑒定出該菌株可能含有新型cry39基因，通過SDS-PAGE分析該菌株產(chǎn)生晶體蛋白大約75kDa，生物測定表明，對淡色庫蚊和白紋伊蚊的殺蟲活性LC50分別為43.833ng/ml和50.846ng/ml。通過改良的轉(zhuǎn)化子池質(zhì)粒DNA文庫篩選方法，篩選出一個含有該基因的陽性克隆子pBU-X，該克隆子插入片段

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