基于工具酶信號放大技術(shù)檢測單堿基突變和地溝油的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在生化分析中有許多待檢測的物質(zhì)由于其本身含量較低，無法用當(dāng)前常規(guī)的方法檢測出來，因此發(fā)展高靈敏的信號放大技術(shù)對不能直接擴增的低濃度待測物質(zhì)進行檢測，在當(dāng)前生化分析研究中尤為重要。在本論文的研究中，以工具酶的信號放大技術(shù)為基礎(chǔ)，結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測和熒光定量PCR檢測技術(shù)，分別提出了對單堿基突變和地溝油快速檢測的方法。其主要內(nèi)容如下：
　　1.利用鏈置換循環(huán)放大化學(xué)發(fā)光法檢測單堿基突變
　　本章基于鏈置換循環(huán)放大和磁珠分離技術(shù)建立

2、了一種操作簡便、快速，室溫下可以高靈敏度和高特異性的檢測單堿基突變的化學(xué)發(fā)光生物傳感器。本章中設(shè)計單堿基突變位點為T4 DNA連接酶的連接位點，目標(biāo)DNA若為突變體DNA，T4 DNA連接酶則將發(fā)夾探針與報告探針連接起來，再通過Klenow Fragment(exo-)聚合酶進行信號的循環(huán)放大，最終檢測化學(xué)發(fā)光信號；而當(dāng)目標(biāo)DNA為野生型DNA，T4 DNA連接酶則不能將兩條探針連接起來，也無法進行信號循環(huán)放大，因此檢測不到化學(xué)發(fā)光信號

3、。該方法利用T4 DNA連接酶和KlenowFragment(exo-)聚合酶進行化學(xué)發(fā)光信號的循環(huán)放大，最終實現(xiàn)了對DNA單堿基突變高靈敏度、高特異性的檢測，其檢測限為1.3×10-16 mol/L(3σ)。
　　2.基于外源動物特征DNA熒光定量PCR快速檢測地溝油的研究
　　本章中構(gòu)建了一種基于線粒體特征序列和熒光定量PCR技術(shù)實現(xiàn)地溝油快速、靈敏檢測的方法。本章轉(zhuǎn)換檢測的理念和檢測對象，以樣品油中外源動物特征DNA作

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