Vaspin通過抑制NF-κB信號途徑上調(diào)THP-1巨噬細胞ABCA1的表達.pdf

1、目的：Vaspin（內(nèi)臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制物）被證實能對抗動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展，其具體作用機制尚未被完全認識。本研究主要探討Vaspin能否通過抑制NF-κB途徑上調(diào)THP-1巨噬細胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ATP-binding cassette transporter A1， ABCA1）表達。
　　方法：將人THP-1單核巨噬細胞誘導轉(zhuǎn)變成為泡沫細胞，經(jīng)不同濃度的Vaspin處理相同時間或同一濃度Vaspin(1

2、00ng/mL)處理不同時間(0,6,12,24,48h)，用液體閃爍計數(shù)法檢測細胞內(nèi)膽固醇流出,油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴情況，高效液相色譜法測定細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇及膽固醇酯含量；Western blot測定細胞內(nèi)ABCA1蛋白含量，實時定量PCR檢測ABCA1 mRNA水平。分別用miR-33a模擬肽（miR-33a mimic）和anti-miR-33a轉(zhuǎn)染THP-1細胞對LPS作用下的細胞處理24h,再加入 vaspin處

3、理24h，檢測細胞內(nèi) ABCA1、miR-33a和SREBP mRNA表達水平。用NF-κB抑制劑預處理LPS作用下的THP-1細胞24h，再加或不加vaspin處理，檢測細胞內(nèi)NF-κB p65蛋白、ABCA1蛋白和mRNA表達、miR-33a mRNA表達、細胞膽固醇的流出情況。
　　結(jié)果：Vaspin上調(diào)THP-1巨噬細胞ABCA1蛋白及mRNA水平呈時間和劑量依賴性。進一步實驗證實vaspin可以抑制miR-33amRNA