一種內切木聚糖酶的親和純化及性質研究.pdf

1、生物質精煉是綠色化工原料和生物燃料的關鍵途徑之一。生物質中纖維素和半纖維素的高效降解是生物質燃料生產(chǎn)得以實現(xiàn)的前提條件。多種纖維素酶和半纖維素酶在生物質的降解過程中發(fā)揮著極其重要的作用。目前對各種纖維素酶和半纖維素酶的組成和催化性質研究還不夠深入，因此純化和鑒定纖維素酶和半纖維素酶各種組分有著非常重要的理論和生產(chǎn)意義。內切木聚糖酶是半纖維素生物降解過程中發(fā)揮主要作用的酶，目前對其的研究還不夠深入。純化獲得該酶的純酶可以開展廣泛的后續(xù)研究

2、，因而具有重大意義。 本文利用實驗室積累的親和層析介質庫對市售纖維素酶HDL160粗品進行篩選，通過SDS-PAGE分析洗脫液的蛋白組成和對CMC-Na、Avicel PH105等底物的降解活力，初步篩選出對一個蛋白純化效果較高的親和層析介質A83-82。然后在20ml親和層析柱上進行NaCl鹽梯度和pH梯度對市售纖維素酶HDL160的純化效果優(yōu)化。最終確定了NaCl濃度為0.6M時為最佳洗脫條件。制備的蛋白，SDS-PAGE純

3、度達單一條帶，分子量19.3kDa左右。經(jīng)質譜MALDI-TOF-TOF分析，蛋白鑒定為內切-β-1,4-D-木聚糖酶。最適底物為木聚糖，還能作用于CMC-Na、Avicel PH105、低聚木糖、棉花纖維等。以木聚糖為底物時最適溫度為55℃，最適pH為4.6。目標酶蛋白還能夠作用于天然生物質，諸如稻草粉、麥草粉、竹子粉以及玉米稈粉等。此外初步實驗還表明納米SiO2、SnO2對目標蛋白的催活活力有明顯的促進作用；該目標蛋白對商品化纖維素