布加氏綜合征致病基因的外顯子測(cè)序研究.pdf

1、背景及目的：原發(fā)性布加氏綜合征（primary budd-chiari syndrome,BCS）發(fā)病機(jī)制及病因復(fù)雜，且亞洲國(guó)家與歐美國(guó)家存在明顯的地域差異。在美歐等西方國(guó)家，原發(fā)性BCS病因多與靜脈血栓形成相關(guān)，目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)JAK2 V617F、FⅤL、FⅡG20210A、MTHFR等多種基因突變與原發(fā)性BCS相關(guān)，這些基因均是血栓形成的危險(xiǎn)因素，它們與多種外部因素共同造成了患者血液處于高凝狀態(tài)，肝靜脈血栓形成導(dǎo)致肝靜脈阻塞而最終

2、演變?yōu)樵l(fā)性 BCS；然而在包括日本、中國(guó)以及印度等亞洲地區(qū)，在西方國(guó)家內(nèi)高表達(dá)的相關(guān)基因卻鮮有表達(dá)，東方國(guó)家原發(fā)型BCS相關(guān)基因仍然處于未知狀態(tài)。
　　分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，下一代測(cè)序技術(shù)以其高通量、低成本的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，使人類(lèi)全基因組測(cè)序成為可能，也為原發(fā)性BCS相關(guān)基因的研究帶來(lái)了新的希望。傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序廣泛運(yùn)用于基因結(jié)構(gòu)的研究，然而其數(shù)據(jù)產(chǎn)出通量低、成本高、操作復(fù)雜的缺陷使其在更深層次的基因研究受限。相較于Sange

3、r測(cè)序，NGS測(cè)序通量是其數(shù)千倍乃至數(shù)萬(wàn)倍，而其成本僅僅是前者的千分之一，許多學(xué)者已經(jīng)依靠NGS平臺(tái)發(fā)現(xiàn)此前從未發(fā)現(xiàn)的基因突變，顯示其在今后基因研究領(lǐng)域潛力無(wú)限。
　　通過(guò)全基因組外顯子組測(cè)序技術(shù)，對(duì)原發(fā)性BCS患者的全部外顯子進(jìn)行篩查，以期發(fā)現(xiàn)特異的基因突變，對(duì)原發(fā)性BCS的病因、發(fā)病機(jī)制等進(jìn)行進(jìn)一步的探討。
　　原發(fā)性BCS是一罕見(jiàn)的臨床綜合征，但在我國(guó)河南、安徽等地區(qū)發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)，具有明顯的地域以及家族聚集現(xiàn)

4、象。發(fā)現(xiàn)原發(fā)性BCS可能存在的致病基因，可以針對(duì)高危人群進(jìn)行早期的檢測(cè)及預(yù)防。
　　方法：
　　1.病例采集
　　本科室長(zhǎng)期隨訪(fǎng)一原發(fā)性BCS家系。家系內(nèi)共8人（5名男性，3名女性），所有人均接受下腔靜脈彩超及CT下腔靜脈成像檢查，確診原發(fā)性BCS患者3名。采集外周靜脈血標(biāo)本。
　　2.外顯子組測(cè)序
　　根據(jù)外顯子組測(cè)序的規(guī)范流程，提取基因組DNA，建立文庫(kù)，外顯子測(cè)序，上機(jī)測(cè)序，生物學(xué)信息分析，確定候選基

5、因。
　　3．?dāng)?shù)據(jù)分析
　　通過(guò)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，蛋白質(zhì)功能預(yù)測(cè)，突變頻率等總結(jié)出感興趣的候選基因。
　　4.候選基因驗(yàn)證
　　對(duì)候選基因進(jìn)行PCR/sanger測(cè)序驗(yàn)證。
　　結(jié)果：外顯子組測(cè)序結(jié)果生物信息學(xué)分析結(jié)果得出2例患者共有53共有基因突變，從中篩選出2兩個(gè)基因突變：HSPG2 c.C4508T、GPR126 c.T3242G。對(duì)這兩個(gè)突變進(jìn)行驗(yàn)證均得到了陽(yáng)性的驗(yàn)證結(jié)果。
　　結(jié)論：HSPG2 c.