基于譜效結(jié)合對(duì)雞血藤不同部位藥效成分的研究.pdf

1、目的:
　　“辨狀論質(zhì)”是根據(jù)中藥材外觀性狀所表現(xiàn)出來(lái)的特征，判斷中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣，是中藥經(jīng)驗(yàn)鑒別的精髓?！氨鏍钫撡|(zhì)”的實(shí)質(zhì)是中藥的外觀性狀與內(nèi)在質(zhì)量具有相關(guān)性。中藥外觀性狀不僅是藥材的外形特點(diǎn)，也是藥材內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)及其內(nèi)含化學(xué)成分的外在表現(xiàn)。雞血藤主要由木質(zhì)部及韌皮部組成，木質(zhì)部淡紅色或棕色;韌皮部有樹(shù)脂狀分泌物呈紅棕色至黑棕色，與木質(zhì)部相同排列呈數(shù)個(gè)同心或偏心性圓環(huán)。傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)對(duì)中藥雞血藤的質(zhì)量評(píng)價(jià)認(rèn)為含樹(shù)脂的偏心性環(huán)紋數(shù)需3～8

2、圈以上，即偏心性環(huán)紋3圈以上，但雞血藤的這種“辨狀論質(zhì)”是否有科學(xué)依據(jù)？其藥效成分是什么？木質(zhì)部與韌皮部的化學(xué)成分有何異同？
　　本研究擬利用譜效結(jié)合的分析方法，找出雞血藤中的藥效成分，并進(jìn)一步對(duì)雞血藤中的木質(zhì)部及韌皮部分別進(jìn)行組織化學(xué)成分的分析，以明確藥效成分兩者間的含量分布情況;對(duì)不同圈數(shù)的雞血藤黃酮部位的藥效成分進(jìn)行含量測(cè)定，以建立藥材外形特征與內(nèi)在質(zhì)量的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.雞血藤總黃酮、木質(zhì)部及韌皮部

3、黃酮部位化學(xué)成分定性分析
　　采用LC-ESI-MS法對(duì)雞血藤總黃酮、木質(zhì)部及韌皮部黃酮部位進(jìn)行定性分析，通過(guò)黃酮類(lèi)化合物的裂解規(guī)律，綜合保留時(shí)間、MS數(shù)據(jù)及參考文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)，對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)木質(zhì)部、韌皮部黃酮部位化學(xué)成分進(jìn)行對(duì)比分析。
　　2.雞血藤黃酮部位對(duì)復(fù)合血虛模型小鼠補(bǔ)血作用研究
　　建立小鼠復(fù)合血虛模型，給予高、中、低劑量雞血藤黃酮部位藥物治療，測(cè)定小鼠外周血像血細(xì)胞及制作脾、腎臟病理切片，觀

4、察所分離的雞血藤黃酮部位對(duì)復(fù)合血虛模型小鼠的補(bǔ)血作用及脾、腎臟的保護(hù)作用。
　　3.雞血藤黃酮部位譜效相關(guān)分析
　　測(cè)定多個(gè)批次雞血藤黃酮部位HPLC圖譜，分別采用灰色關(guān)聯(lián)分析和皮爾遜相關(guān)分析方法，分析HPLC特征峰所代表的化學(xué)成分對(duì)補(bǔ)血作用的關(guān)聯(lián)度和相關(guān)性，以找出其補(bǔ)血作用的藥效成分。
　　4.雞血藤木質(zhì)部、韌皮部黃酮部位的HPLC圖譜對(duì)比研究及藥效成分在雞血藤不同組織中含量分布差異的研究
　　4.1木質(zhì)部、韌

5、皮部黃酮部位的藥效成分分布規(guī)律研究
　　取多個(gè)南領(lǐng)藥材種植基地雞血藤藥材，對(duì)木質(zhì)部、韌皮部黃酮部位中藥效成分進(jìn)行含量測(cè)定，并比較藥效成分在兩者間的含量分布規(guī)律。
　　4.2不同圈數(shù)雞血藤黃酮部位的藥效成分分布規(guī)律研究
　　篩選不同圈數(shù)的雞血藤切片，對(duì)黃酮部位中藥效成分進(jìn)行含量測(cè)定，并分析藥效成分在不同圈數(shù)雞血藤中的含量分布差異。
　　結(jié)果:
　　1.雞血藤木質(zhì)部及韌皮部黃酮部位化學(xué)成分定性分析
　　建

6、立了一個(gè)LC-ESI-MS對(duì)雞血藤黃酮部位化學(xué)成分進(jìn)行定性分析的方法，從雞血藤黃酮部位中分離23個(gè)化合物，共推斷出黃酮類(lèi)化合物10個(gè)，并對(duì)10個(gè)化合物質(zhì)譜裂解方式進(jìn)行解析。韌皮部中所檢測(cè)到的21個(gè)化合物在木質(zhì)部中均可以檢測(cè)到，但是各個(gè)成分的離子峰相對(duì)強(qiáng)度在兩個(gè)部位中不相同，說(shuō)明其在兩者間的化學(xué)成分與含量有一定的差別。
　　2.雞血藤黃酮部位對(duì)復(fù)合血虛模型小鼠補(bǔ)血作用研究
　　給予雞血藤黃酮部位高、中、低劑量后，模型小鼠RBC

7、、HGB、HCT數(shù)量均上升，且與模型組比較具有極顯著差異(P＜0.01)。HE病理切片結(jié)果表明，與空白組比較，模型組發(fā)生與造血相關(guān)臟器的炎癥病變，給予雞血藤黃酮部位藥物治療后，脾、腎臟的炎癥及組織損傷情況有所改善。
　　3.雞血藤黃酮部位對(duì)復(fù)合血虛模型小鼠補(bǔ)血作用及其譜效相關(guān)分析
　　選取有較大關(guān)聯(lián)性或相關(guān)性較好的成分為雞血藤黃酮部位補(bǔ)血作用的藥效成分。雞血藤黃酮部位中抑制復(fù)合血虛模型小鼠外周血像中RBC、HGB、HCT含量

8、降低的藥效成分主要是1、2（兒茶素）、4（表兒茶素）、5（大豆苷）、8、6、10(芒柄花昔)、12(8-甲雷杜辛-7β-葡萄糖苷)、14(芒柄花素)號(hào)峰，雞血藤黃酮部位發(fā)揮補(bǔ)血藥效的是其化學(xué)成分群的共同作用。
　　4.雞血藤藥效成分在不同組織中含量分布差異
　　4.1木質(zhì)部、韌皮部黃酮部位的藥效成分分布規(guī)律研究
　　結(jié)果顯示，5種成分在木質(zhì)部中的含量高于韌皮部中的含量，特別是芒柄花素、芒柄花苷、大豆苷;兒茶素、表兒茶素

9、在木質(zhì)部、韌皮部中含量雖存在差異，但在兩者之間的含量差異相對(duì)較小。
　　4.2不同圈數(shù)雞血藤黃酮部位的藥效成分的分布規(guī)律研究
　　2圈～5圈的雞血藤黃酮部位中，5種藥效成分含量與藥材切片的圈數(shù)均呈正相關(guān)性。圈數(shù)越多，藥效成分的含量越高。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)雞血藤黃酮部位化學(xué)成分進(jìn)行LC-ESI-MS分離、鑒定，較為全面地分析雞血藤黃酮部位的化學(xué)成分組成;對(duì)所分離雞血藤黃酮部位進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)，證實(shí)其具有明顯的補(bǔ)