熱休克蛋白27在口腔扁平苔蘚及其癌變中的表達及意義.pdf

1、扁平苔蘚(lichen planus，LP)是伴有慢性淺表性炎癥的角化異常性皮膚-黏膜疾病之一，病因至今不明，可單獨或同時發(fā)生在皮膚、黏膜和指（趾）甲。發(fā)生在口腔的病損即為口腔扁平苔蘚(oral lichenplanus，OLP)，是口腔黏膜病中常見疾病，僅次于復發(fā)性口腔潰瘍，患病率約為0.51％，中年女性好發(fā)?；咎攸c是口腔黏膜左右對稱的出現(xiàn)珠光灰白色條紋，可交織成網(wǎng)狀或樹枝狀，條紋基底黏膜充血，重則糜爛，病程長，易復發(fā)。OLP病因復

2、雜，臨床分型尚無統(tǒng)一標準，Seoane等根據(jù)OLP不同的生物學行為將其分為糜爛型和非糜爛型，糜爛型病損較非糜爛型易發(fā)生惡變，但其致癌機制至今不詳。
　　口腔鱗狀細胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是口腔頜面部最為常見的惡性腫瘤，約占口腔惡性腫瘤的90％，其導致的的死亡率居口腔癌之首，危害極大。多發(fā)生于40～60歲的成人，以舌、頰、牙齦、腭、上頜竇最為常見，主要表現(xiàn)為無痛性的腫塊、硬結(jié)或潰瘍，

3、繼發(fā)感染或侵犯神經(jīng)，可出現(xiàn)疼痛。世界衛(wèi)生組織(WHO，2005)根據(jù)腫瘤的惡性程度、細胞和細胞核的多形性以及細胞分裂活性等將OSCC分為高、中、低分化三級。臨床上部分口腔扁平苔蘚可轉(zhuǎn)變?yōu)镺SCC，特別是糜爛型OLP其癌變風險更大，且病損持續(xù)時間越長，惡變的可能性就越高。1910年，Hallopean首次報道OLP癌變病例，此后國內(nèi)外相繼研究表明OLP具有癌變傾向?？谇槐馄教μ\癌變的發(fā)生發(fā)展經(jīng)歷著一個“正?？谇火つど掀ぜ毎┣安∽儭惓?/p>

4、增生→OSCC”的動態(tài)過程，是多階段、多基因、多因素條件共同作用的結(jié)果，其病因和發(fā)病機制尚不清楚。
　　熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)又稱應(yīng)激蛋白，是廣泛存在于生物界具有高度保守性質(zhì)的一組蛋白質(zhì)，遺傳學家Ritossa在1962年研究果蠅唾液腺時首次發(fā)現(xiàn)?，F(xiàn)應(yīng)用最多的是森本劃分方法，將HSP主要分為HSP90、HSP70、HSP60、小分子量HSP(sHSP)4個家族。熱休克蛋白27(heat shoc

5、k protein27，HSP27)是sHSP家族中成員之一，在生理狀態(tài)下表達水平較低，參與調(diào)控細胞增殖、分化等生理過程，當機體受到外界環(huán)境刺激時，主要通過促進不可逆損傷的蛋白質(zhì)水解來發(fā)揮保護細胞的作用，也可通過抑制變性蛋白質(zhì)聚集和細胞凋亡來實現(xiàn)?，F(xiàn)研究報道，在許多惡性腫瘤組織中，如肝癌、乳腺癌、大腸癌、前列腺癌等HSP27的表達都增高。雖HSP27與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有一定聯(lián)系，但關(guān)于HSP27在口腔扁平苔蘚及其癌變中的表達及相關(guān)

6、關(guān)系尚未有研究。
　　目的:本實驗通過免疫組織化學技術(shù)，觀察HSP27在口腔扁平苔蘚病損組織和口腔鱗狀細胞癌（均由口腔扁平苔蘚癌變而來）病損組織中的表達水平，探討HSP27在口腔扁平苔蘚及其癌變發(fā)生發(fā)展過程中表達水平的變化，為臨床上診斷及治療口腔扁平苔蘚及其癌變提供新的方法。
　　方法:搜集口腔扁平苔蘚組織蠟塊32例，均經(jīng)河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院臨床和病理科提供。其中無上皮異常增生18例，伴有上皮異常增生14例。以上病例在取活檢

7、前3個月內(nèi)均未使用任何免疫抑制劑類藥物和皮質(zhì)類固醇激素等?？谇击[狀細胞癌組織蠟塊（均由口腔扁平苔蘚癌變而來）8例。所有患者在術(shù)前均未接受放化療及免疫治療，且術(shù)后病理證實為鱗狀細胞癌。另取15例行牙冠延長術(shù)、拔出埋伏阻生智齒、口腔頜面部外傷清創(chuàng)縫合術(shù)過程中需切除的正常黏膜組織作為對照組。標本均經(jīng)4％多聚甲醛固定24小時，制備5μm厚切片，石蠟包埋備用。
　　采用免疫組化SP法對HSP27進行免疫組化染色。以已知的HSP27陽性標本作

8、為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。HSP27免疫組化染色陽性為胞漿或胞膜出現(xiàn)黃色或棕黃色染色，無棕黃色染色為陰性表達。采用圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析。免疫組化結(jié)果采用半定量積分法（積分=染色強度×染色細胞比例）判定。記錄兩種因子的染色強度和陽性細胞百分比的評分，將兩項得分相乘得出最終結(jié)果。按照最后得分分為以下四個等級:0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+)，4～8分為中度陽性，≥9分為強陽性(+++)。
　

9、　所得數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析，免疫組化單因素研究實驗結(jié)果采用x2檢驗，組間比較采用等級資料秩和檢驗。檢驗水準α取0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、HSP27在正常黏膜組中的染色結(jié)果
　　正?？谇火つSP27陽性表達比較低，主要以細胞漿為主。15例正?？谇火つぶ袃H3例呈弱陽性表達，陽性表達率為20.0％。
　　2、HSP27在口腔扁平苔蘚組中的染色結(jié)果

10、　　在口腔扁平苔蘚伴有或不伴有上皮異常增生的組織中，HSP27表達的部位不同。
　　在口腔扁平苔蘚不伴有上皮異常增生組織中，HSP27陽性表達主要位于基底層細胞和棘層細胞，顆粒層零星出現(xiàn)陽性表達，棘層細胞出現(xiàn)強陽性表達，固有層浸潤淋巴細胞內(nèi)偶爾可見弱陽性表達。18例OLP無上皮異常增生組織中12例出現(xiàn)陽性表達，其陽性表達率為66.67％，陽性表達高于正常口腔黏膜組。與正?？谇火つそM相比，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　在

11、口腔扁平苔蘚伴上皮異常增生組織中，HSP27在上皮固有層可見陽性表達，基底層細胞中出現(xiàn)強陽性表達。14例OLP伴有上皮異常增生組織中有11例出現(xiàn)不同程度陽性表達，陽性表達率為78.57％。與正常黏膜組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但與OLP無上皮異常增生組織組相比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3、HSP27在口腔鱗狀細胞癌中的表達
　　在口腔鱗狀細胞癌組織中，HSP27的表達主要位于癌細胞，癌巢中央成強陽性表達，

12、周邊區(qū)癌細胞弱陽性表達。8例OSCC病損組織中有5例出現(xiàn)強陽性表達，陽性表達率為87.50％，明顯高于前三組。與正?？谇火つそM和OLP無上皮異常增生組織組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，與OLP伴有上皮異常增生組織相比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。至于HSP27在OSCC分型中的表達本實驗尚未做相關(guān)研究。
　　實驗數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學分析，四組之間相比用x2檢驗得出x2值為29.966，P值為0.001（P＜005）為差異有統(tǒng)計學意義