NT-3通過激活BMP信號通路來促進骨髓間充質干細胞向類神經(jīng)細胞分化.pdf

1、目的:
　　本實驗主要研究利用質粒向骨髓間充質干細胞(BMSCs)中導入神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)基因，觀察BMSC是否可向類神經(jīng)樣細胞方向分化，并探討在間充質干細胞中轉染的NT-3基因與BMP信號通路關系。
　　方法:
　　先從大鼠股骨干中提取骨髓間充質干細胞，取等量細胞分別對其進行處理:只加PBS（空白對照A組）、轉染plRES2-EGFP（空載體轉染B組），轉染plRES2-EGFP-NT-3（轉染C組）和加入

2、BMP4因子（D組）。在轉染plRES2-EGFP-NT-3的BMSCs中在分別添加noggin（E組）和利用siRNA技術沉默其Trkc基因（F組）。利用免疫熒光、PCR、western、全細胞膜片鉗、細胞內鈣離子等檢測手段觀察NT-3因子轉染率情況和BMSCs的形態(tài)學變化、神經(jīng)功能檢測、神經(jīng)細胞特異性因子表達情況。同時分析NT-3因子與Trkc蛋白表達和BMP信號通路及其下游Smad表達的變化的相關性。
　　結果:
　　

3、脂質體介導的plRES2-EGFP-NT-3成功轉染到BMSC中并且高表達神經(jīng)細胞特異性因子Nestin、NSE和MAP-2，說明NT-3能夠促進BMSC分化為具有一定神經(jīng)功能的類神經(jīng)元細胞。同時利用western檢測我們發(fā)現(xiàn)NT-3因子可以促進BMP增多，激活下游Smad磷酸化。在加入BMP的拮抗劑Noggin后，NT-3促進間充質干細胞神經(jīng)分化作用減弱，表達神經(jīng)細胞特異性因子減少。在利用siRNA基因沉默技術沉默BMSC受體Trkc