PLGA納米粒對大鼠肝CYP450酶活性影響的研究.pdf

1、近年來，隨著納米粒給藥系統(tǒng)的廣泛研究，納米粒對體內生物系統(tǒng)功能的影響引起的安全性問題日益引起人們關注。聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）是目前應用最廣泛的聚合物納米粒材料之一，但PLGA納米粒對機體CYP450酶功能影響尚不清楚，本課題旨在探究不同粒徑PLGA納米粒對大鼠肝CYP450酶的抑制和誘導作用，并對其作用機制進行初步探討，以期為 PLGA納米粒的研究開發(fā)和安全性評價提供依據。
　　首先，本文根據現有文獻報道的PLGA納米

2、粒粒徑大小，采用納米沉淀法和透析法制備粒徑范圍從50～500nm的5種PLGA納米粒（NP60、NP100、NP150、NP300、NP450）和荷載熒光物質香豆素6的PLGA納米粒，經激光粒度分析儀和透射電鏡檢測結果顯示，各種PLGA納米粒的粒徑分布均勻，所建立制備方法易于獲得預期粒徑大小的納米粒，且重現性良好。
　　其次，以大鼠肝微粒體模型，通過LC-MS/MS檢測5種CYP450酶6種探針底物的代謝產物生成量變化，進而評價P

3、LGA納米粒對CYP450酶活性的抑制作用。研究結果顯示，NP300對midazolam1’-hydroxylation、testosterone6β-hydroxylation、phenacetin O-deethylation、(s)-mephenytoin4’-hydroxylation和dextromethorphan O-demethylation等均具有一定的抑制作用，其IC50值依次為0.6331、1.425、2.506、

4、1.840、1.526mg·mL-1；NP450對midazolam1’-hydroxylation、phenacetin O-deethylation、tolbutamide4’-hdroxylation、(s)-mephenytoin4’-hydroxylation和dextromethorphan O-demethylation的IC50值依次為0.9667、0.8972、1.520、1.318、2.924mg·mL-1；而其他粒

5、徑PLGA納米粒對各代謝反應的IC50值大于3mg·mL-1，抑制作用不明顯。研究結果提示，較大粒徑PLGA納米粒（NP300和NP450）對CYP450酶活性的抑制作用較明顯，且當濃度達到1mg·mL-1時，其抑制作用較顯著。
　　最后，本試驗采用混合探針底物法和LC-MS/MS檢測手段進一步考察PLGA納米粒對原代大鼠肝細胞CYP450酶活性的影響；并通過實時定量PCR技術，檢測mRNA表達水平的變化。實驗結果表明，各粒徑PL

6、GA納米粒均可顯著誘導phenacetin O-deethylation（P<0.05或0.01）；除1～100μg·mL-1NP450外，其余粒徑和各濃度下的PLGA納米粒均可誘導bupropion hydroxylation（P<0.05或0.01）；NP300也可顯著誘導diclofenac4’-hydroxylation（P<0.05或0.01）；而各粒徑、各濃度PLGA納米粒對midazolam1’-hydroxylation

7、無顯著誘導作用。PCR試驗結果顯示，各粒徑納米粒均能上調Cyp1a2、Cyp2b1、Cyp2c6和Cyp3a2基因的表達，其中Cyp1a2和Cyp2b1基因上調結果與酶活性試驗結果相一致；而PLGA納米粒對Cyp2c6和Cyp3a2基因的表達無明顯的濃度依賴性和粒徑依賴性。
　　本文首次采用大鼠微粒體和原代肝細胞模型，評價了五種粒徑PLGA納米粒對大鼠CYP450酶活性或基因表達水平的影響，提示存在潛在的PLGA納米粒-藥物相互作