人參炔醇抑制胰腺癌干細胞的增殖及自我更新.pdf

1、實驗目的：
　　通過各種方法及相關蛋白的測定，探討人參炔醇對胰腺癌干細胞增殖及自我更新的影響。
　　實驗方法：
　　（1）胰腺癌干細胞培養(yǎng)：胰腺癌Panc-1細胞在加有EGF、bFGF及B27的干細胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)基中培養(yǎng)，參照試劑說明及其他文獻培養(yǎng)成胰腺癌干細胞，細胞的CD133+用流式細胞儀進行檢測，觀察培養(yǎng)后細胞的干性比例；
　?。?）胰腺癌干細胞分選：為了得到更高比例的胰腺癌干細胞，通過流式細胞儀將培養(yǎng)的細

2、胞進行CD133+分選。
　　（3）CCK8實驗：將人參炔醇分為0、72、144、287nmol/L四個藥物濃度分別作用于胰腺癌干細胞，作用時間為0、12、24、48h，CCK8實驗選出合適的藥物作用濃度及最佳的作用時間；
　?。?）克隆實驗：濃度為0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用于胰腺癌干細胞48h后，將干細胞消化為單個細胞，并重新種于6孔板中培養(yǎng)兩周，形成集落后，對實驗組與對照組集落的數(shù)目進行比較；

3、r>　　（5）western blot實驗：檢測增殖相關蛋白Ki67、PCNA及自我更新有關蛋白β-catenin。
　　實驗結(jié)果：
　　（1）經(jīng)干細胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)的胰腺癌干細胞，用流式細胞儀檢測其CD133+比例為9.96％，對照組干性比例為2.21%，兩組相比具顯著統(tǒng)計學意義（P<0.001）；
　?。?）經(jīng)過細胞分選后，胰腺癌干細胞比例為96.78%，對照組為3.67%，兩組相比具有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.001

4、）；
　?。?）CCK8實驗OD值檢測顯示，人參炔醇減少胰腺癌干細胞的存活率，藥物作用具有濃度依賴性，并隨著時間延長作用加強，0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用胰腺癌干細胞48h后存活率分別為100%、63.13%、50.32%、41.62%，結(jié)果具有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.001）；
　?。?）克隆實驗中，數(shù)量上實驗組的集落少于對照組（P<0.001）；
　　（5）人參炔醇作用48h后，胰腺癌干細胞的