腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對壓力性尿失禁大鼠模型控尿功能的影響.pdf

1、一、研究背景：
　　壓力性尿失禁（Stress Urinary Incontinence，SUI）是一種困擾著中老年女性的多發(fā)病，其特點(diǎn)為在腹壓突然增加時發(fā)生尿液經(jīng)尿道外口不自主地漏出。目前，陰道分娩被認(rèn)為是SUI最重要的病理生理學(xué)機(jī)制之一。臨床隨訪及動物模型研究發(fā)現(xiàn)，陰道分娩過程中胎兒會對盆底肌肉、神經(jīng)及結(jié)締組織造成不同程度的損傷，并影響著產(chǎn)后SUI的發(fā)生。
　　長期臨床隨訪研究表明，在產(chǎn)后5-7年出現(xiàn)SUI的女性中，陰部

2、神經(jīng)動作電位潛伏期明顯延長，這意味著尿道外括約?。‥xternal Urethral Sphincter，EUS）的神經(jīng)支配仍處于不完全恢復(fù)狀態(tài)。這一結(jié)果也進(jìn)一步得到了我們的前期研究的證實(shí)，即當(dāng)雙重?fù)p傷SUI大鼠模型的EUS功能和尿道阻力已經(jīng)恢復(fù)至正常范圍時，形態(tài)學(xué)研究仍可觀察到EUS的神經(jīng)支配處于異常狀態(tài)。上述結(jié)果均強(qiáng)調(diào)出了陰道分娩過程中與控尿相關(guān)神經(jīng)損傷的重要性，這也提示恢復(fù)這些神經(jīng)的功能可能將成為臨床治療的核心內(nèi)容。
　　在

3、促進(jìn)神經(jīng)的生長、存活及損傷后的再生修復(fù)過程中，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived Neruotrophic Factor，BDNF)發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。此外，它還是一種參與下尿路神經(jīng)調(diào)控的重要神經(jīng)調(diào)制，它與多種下尿路功能障礙性疾病的病理生理學(xué)過程相關(guān)，包括:膀胱過度活動癥、SUI、間質(zhì)性膀胱炎/膀胱疼痛綜合征及神經(jīng)源性膀胱等。不僅如此，動物模型研究也表明陰部神經(jīng)的損傷后修復(fù)需要BDNF的參與。因此，在本研究中我們選擇了BDN

4、F為切入點(diǎn)探索它對SUI大鼠模型控尿功能的影響。
　　二、研究目的：
　　本研究旨為探索BDNF對雙重?fù)p傷SUI大鼠模型控尿功能的影響。其結(jié)果將進(jìn)一步解釋神經(jīng)源性異常在臨床SUI發(fā)生機(jī)制中的重要地位，并為開發(fā)新的臨床治療方法提供理論依據(jù)，同時也將為預(yù)防SUI的發(fā)生提供一種全新的思路。本研究包括以下3部分:
　　第一部分:研究局部應(yīng)用外源性BDNF對SUI大鼠模型的陰部神經(jīng)進(jìn)行局部治療對其控尿功能及神經(jīng)恢復(fù)的影響。

5、>　　第二部分:探索短期單次陰部神經(jīng)運(yùn)動支電刺激對大鼠陰部神經(jīng)核團(tuán)BDNF表達(dá)及其下尿路功能的影響。
　　第三部分:探索長時程周期性陰部神經(jīng)電刺激對BDNF表達(dá)及SUI大鼠模型控尿功能及神經(jīng)恢復(fù)的影響。
　　三、研究設(shè)計
　　第一部分:將93只雌性、年齡相近的SD大鼠隨機(jī)分為以下3組: SUI模型+BDNF治療組、SUI模型+生理鹽水治療組、假損傷模型+生理鹽水治療組。SUI模型的建立包括雙側(cè)陰部神經(jīng)損傷(Pudend

6、al Nerve Crush，PNC)和持續(xù)4小時的陰道擴(kuò)張(Vaginal Distension，VD)。BDNF和生理鹽水的給予采用的是植入式mini-osmotic泵對雙側(cè)損傷的神經(jīng)進(jìn)行歷時2周或3周的局部治療。假損傷組除不進(jìn)行PNC和VD外，其余操作均與模型組相同。對上述的一部分大鼠將進(jìn)行漏尿點(diǎn)壓(Leak Point Pressure，LPP)與EUS肌電圖（Electromyography，EMG）的同步測定，完畢后收取EU

7、S組織進(jìn)行神經(jīng)肌肉接頭的熒光染色形態(tài)學(xué)分析;另一部分動物將分別于4天、8天和12天時通過定量PCR和免疫熒光的手段檢測BDNF和βⅡ微管蛋白的表達(dá)。組間差異分析將采用雙因素的方差分析合并Holm-Sidak事后多重比較，P＜0.05定義為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　第二部分:將46只雌性成年大鼠隨機(jī)分為2組:雙重?fù)p傷SUI大鼠模型組(n=23)和對照損傷假手術(shù)組(n=23)，并即刻予以為期1小時的單側(cè)陰部神經(jīng)運(yùn)動支電刺激（左側(cè)神經(jīng)電刺激，

8、右側(cè)無電刺激）。完畢后，對一部分大鼠予以膀胱和肛門外括約肌的功能學(xué)測定;另一部分大鼠在接受電刺激治療后，于2天和1周時，進(jìn)行雙側(cè)陰部神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)BDNF和βⅡ微管蛋白的定量檢測。組間統(tǒng)計學(xué)分析采用的是兩因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比較。對于BDNF和βⅡ微管蛋白的定量數(shù)據(jù)相對量的比較采用的是單樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05表明有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　第三部分:將60只年齡、體重相仿的雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩

9、組:SUI模型組（n=34只）和對照損傷假手術(shù)組（n=26只），模型建立后立即予以雙側(cè)陰部神經(jīng)電極植入。隨后，將其中一部分大鼠隨機(jī)分為3組:SUI+雙側(cè)電刺激組、SUI+無電刺激組、假損傷+無電刺激組。兩周后，對各組的大鼠進(jìn)行膀胱功能與控尿功能的檢測。另一部分大鼠在雙側(cè)電極植入后即刻開始對左側(cè)陰部神經(jīng)進(jìn)行歷時1小時的單側(cè)電刺激，而右側(cè)不予以電刺激作為對照，在2天、1周和2周時，用定量PCR法檢分析陰部神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)BDNF和βⅡ微管蛋白的基

10、因表達(dá)量。對左右側(cè)Onuf's核團(tuán)內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA表達(dá)的比較采用的是單樣本的t檢驗(yàn)。對雙側(cè)陰部神經(jīng)電刺激后的膀胱及控尿功能檢測指標(biāo)的組間比較采用的是雙因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比較的方法，P＜0.05代表有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　四、研究結(jié)果：
　　第一部分:局部予以BDNF治療不但可有助于大鼠控尿功能的早期恢復(fù)，還可改善EUS和神經(jīng)肌肉接頭的組織學(xué)形態(tài)。不僅如此，BDNF局

11、部治療可提高陰部神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達(dá)量。
　　第二部分:短期單次陰部神經(jīng)運(yùn)動支電刺激可顯著改善模型鼠的膀胱和肛門外括約肌功能，在給予電刺激的左側(cè)陰部神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達(dá)均較右側(cè)有顯著的提高。
　　第三部分:長時程周期性陰部神經(jīng)電刺激可顯著提升Onuf's核團(tuán)內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達(dá)量，并有助于模型鼠控尿功能的早期恢復(fù)。此外，雙側(cè)陰部神經(jīng)電刺激還有助于改善大鼠的