浙貝母提取物對異丙腎上腺素誘導H9c2心肌細胞肥厚的干預作用及機制研究.pdf

1、目的:觀察異丙腎上腺素(Iso)誘導H9c2心肌細胞肥厚中Toll樣受體4（TLR4）/激活蛋白1（activator protein-1，AP-1）信號通路及腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素6（IL-6）的改變，探討研究浙貝母提取物對Iso致心肌肥厚的干預作用及機制。
　　方法:(1)MTT法檢測Iso、浙貝母提取物、卡托普利對H9c2心肌細胞存活率的影響，確定它們的安全濃度范圍。(2)在Iso對H9c2心肌細胞安全濃度范圍中

2、，設立濃度梯度，篩選出最佳造模濃度。(3)采用結晶紫染色，倒置熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài)，image-pro plus6.0軟件測量各處理組心肌細胞的面積。(4)二辛可酸(BCA)法測定各組細胞總蛋白含量。(5)酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測細胞外液中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素6（IL-6）的濃度。(6)Western blot檢測TLR4、AP-1、心鈉肽(ANP)蛋白的表達。
　　結果:(1)Iso對H9c2心肌細胞

3、的安全濃度范圍在30μmol/L之內;浙貝母提取物對H9c2心肌細胞的安全濃度范圍在2000μg/mL之內;卡托普利對H9c2心肌細胞的安全濃度范圍在0.2m mol/L之內。(2)Iso的最佳造模濃度為20μmol/L。(3)模型組中的H9c2心肌細胞表面積高于其他各組，并與正常組的差異有顯著性意義(P＜0.001)，浙貝母提取物高劑量組的H9c2心肌細胞表面積有所變小，其對心肌細胞肥厚有保護作用。(4)模型組的總蛋白含量高于其他各組

4、，與正常組的比較差異有顯著性意義(P＜0.001)，陽性對照組的總蛋白含量接近于正常組。(5)模型組中細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6的濃度升高，高劑量組中的有所降低，并與模型組的差異有顯著性意義(P＜0.001)。(6)模型組中ⅡR4、AP-1、ANP蛋白表達上調，高劑量組和陽性對照組中這些蛋白的表達均降低下調。
　　結論:浙貝母提取物對Iso致H9c2心肌細胞肥厚具有一定的保護作用，其機制可能與減少TNF-α、IL-6的釋放，