美國紅魚和真鯛卵黃原蛋白的分離純化及在內分泌干擾物篩選中的應用.pdf

1、近年來,內分泌干擾物對野生動物和人類的危害已成為一個全球關注的重大問題,進行生物標志物的研究、發(fā)展快速可靠的內分泌擾亂物質篩選和評價方法具有重要意義。本文選擇兩種海洋魚類美國紅魚和真鯛,進行卵黃原蛋白(VTG)的分離純化和電泳性質研究,并針對國內廣泛使用的農藥久效磷,以美國紅魚幼魚為模型生物,以VTG的產生建立有機磷農藥內分泌擾亂效應的篩選體系。同時,為了全面深入探討久效磷對機體的損害,研究了其對美國紅魚肝、腎、鰓、腸組織顯微結構的影響

2、。 腹腔注射0.02 mg/gBW 17β-雌二醇,誘導美國紅魚和真鯛一周后取尾靜脈血,離心分離得到的血漿經Sephacryl S-300 high resolution分子篩和DEAESepharose fast flow離子交換分離,得到純化的卵黃原蛋白。經常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳,考馬斯亮藍染色、糖、磷、脂的特征性基團染色及分子量計算的結果表明:17β-雌二醇誘導美國紅魚產生了分子量為344kDa和247kDa的兩種VTG,

3、誘導真鯛產生了分子量為455kDa的VTG。以SDS-PAGE方法得出美國紅魚VTG三種亞基的分子量為152kDa、133 kDa、118 kDa,真鯛VTG的兩種亞基分子量為220和88kDa。 以0.01和0.1 mg L<'-1>的久效磷暴露美國紅魚幼魚21天,各暴露組均誘導了幼魚VTG的產生,暴露組幼魚血漿總蛋白含量和血漿鈣離子含量比對照組均明顯提高,兩個暴露組相比,高濃度組鈣離子含量也明顯高于低濃度組(p<0.05)。