孤立性早發(fā)骨關節(jié)炎型肝豆狀核變性的基因型和臨床病程——一家系兩患病同胞.pdf

1、背景
　　肝豆狀核變性(hepatolenticular degeneration，HLD)又稱威爾遜病(Wilson'sdisease，WD，OMIM277900)，是一種以銅代謝障礙為發(fā)病機制的常染色體隱性單基因遺傳病，其致病基因為ATP7B基因，主要在肝臟細胞中表達。ATP7B蛋白在肝細胞內負責銅離子的轉運，其在肝細胞合成功能性銅藍蛋白的過程中發(fā)揮重要作用，并且還參與將肝細胞內多余的銅排入膽管。
　　ATP7B基因上的

2、致病性變異使其表達產物ATP7B蛋白功能異常，從而導致銅離子在肝細胞中異常沉積、造成肝細胞損傷甚至壞死。過多的銅離子進一步自肝臟中溢出進入血液、隨全身血液循環(huán)抵達全身各組織器官并對其造成損傷，從而表現出一系列的臨床癥狀體征。WD的生化特點為血清功能性銅藍蛋白和血清總銅水平明顯降低，同時血清自由銅和尿銅水平異常升高。
　　WD患者多在青少年或成年早期起病，最常見的臨床表現為肝損傷、肝硬化、運動障礙、認知障礙、精神行為異常、眼角膜KF

3、環(huán)、Coombs試驗陰性的溶血性貧血，其他還有腎功能異常、骨骼肌肉系統(tǒng)病變、內分泌疾病、不孕不育等。WD一經確診若無禁忌應盡早開始治療，并且是終生治療，一般可獲得良好預后;未經治療的WD其結局往往是致命性的，且多數死于肝衰竭。
　　本病具有廣泛的臨床表型異質性和基因型異質性，至今仍未能系統(tǒng)建立臨床表型與基因型之間的關聯?；颊叩钠鸩∧挲g跨度可在最小9個月至最大80歲之間，其起病形式、病程特點和主要臨床表現也有較大的個體間差異。目前已

4、在ATP7B基因上發(fā)現了800余種可能致病或致病性變異。WD的異質性給相當一部分臨床表現不典型的WD患者的早診斷早治療構成了巨大挑戰(zhàn)，臨床上延誤診療的案例常有發(fā)生。
　　作為本病的少見表現，WD的骨關節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)同樣存在較大的異質性，其在WD病程的早期通常不會引起臨床醫(yī)師的注意;特別是當骨關節(jié)病變作為某WD患病個體的主要臨床表現時，將極易導致漏診、誤診。雖然過去一般認為WD的骨關節(jié)炎病情較輕，但事實上

5、并無確鑿的自然病史證據支持這一點。既往也沒有研究報道過與WD骨關節(jié)病有關的基因型。
　　目的
　　描述和總結兩例孤立性早發(fā)骨關節(jié)炎型WD患病同胞的臨床表型、自然病程，并對其進行基因診斷、記錄基因型，最后結合文獻調研探討本WD家系對今后臨床實踐的啟發(fā)。
　　對象和方法
　　調查對象為中國山東濟寧地區(qū)一WD家系。繪制系譜圖，采集并記錄患者的一般信息、病史、病程發(fā)展、體格檢查結果、可獲得的實驗室檢查結果，采集并記錄非患

6、者的一般信息、既往病史。
　　提取調查對象的外周血淋巴細胞核基因組DNA。采用目標序列捕獲（Targeted gene capture，TGC）聯合二代測序(Next Generation Sequencing，NGS)技術，對先證者439種遺傳代謝病致病基因的所有編碼序列和外顯子側翼序列進行高通量測序。
　　對測序數據進行生物信息學分析，產生有意義位點。對篩選出的目標位點進行Sanger一代測序或多重連接探針擴增技術(mu

7、ltiple ligation-dependent probeamplification，MLPA)進行驗證。進一步在家系中對上述目標位點進行篩查。
　　對目標變異按照美國醫(yī)學遺傳學和基因組學會(American College of MedicalGenetics and Genomics，ACMG)于2015年頒布的序列變異解讀指南進行致病性評估。
　　結果
　　本家系中包括2名WD患病同胞與4名非患者。兩患病同胞

8、的臨床表型高度一致，均表現為青少年起病的早發(fā)性骨關節(jié)炎(Prematureosteoarthritis，POA)、并在起病后長達20年或更久的時間中以此為唯一臨床癥狀，病變主要累及膝關節(jié)、髖關節(jié)等大關節(jié)。兩患病同胞長期未得到正確診治，其中年長患病同胞的在38歲時即已致殘。通過檢索Pubmed和SCI數據庫，我們未發(fā)現有與本家系患者臨床表型一致的WD報道。
　　在先證者的ATP7B基因上發(fā)現了兩處不同的致病性變異構成復合雜合突變，分