基因沉默ATF5聯(lián)合更昔洛韋對HCMV陽性膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖及病毒復(fù)制的影響.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，盡管采取積極的治療措施，預(yù)后依然很差。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤環(huán)境中，人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）基因及轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達(dá)隨著腫瘤惡性程度的增高而增高，其感染與神經(jīng)膠質(zhì)瘤關(guān)系密切。轉(zhuǎn)錄激活因子5（Activating transcription factor5，ATF5）是腫瘤標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中特異性高表達(dá)。本文在神經(jīng)膠質(zhì)瘤環(huán)境中，探討基因沉默ATF5聯(lián)合抗

2、病毒藥物更昔洛韋（ganciclovir，GCV）對HCMV陽性膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖及病毒復(fù)制的影響。研究首先篩選合適的GCV作用濃度；利用慢病毒介導(dǎo)的小干擾RNA靶向干擾ATF5基因的表達(dá)，構(gòu)建ATF5下調(diào)穩(wěn)定表達(dá)的LV-ATF5-RNAi U87細(xì)胞系；低感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)的HCMV感染 LV-ATF5-RNAi U87細(xì)胞，并用含GCV的培養(yǎng)基培養(yǎng)。在該條件下，CCK-8法檢測

3、細(xì)胞的增殖活性；Real-time PCR、western-blot分別檢測HCMV即刻早期（IE）、早期（UL44）、晚期（UL99）基因及蛋白表達(dá)水平；空斑形成試驗(yàn)檢測HCMV子代病毒復(fù)制水平。結(jié)果表明：成功構(gòu)建ATF5下調(diào)穩(wěn)定表達(dá)的LV-ATF5-RNAi U87細(xì)胞?；虺聊珹TF5聯(lián)合GCV共同作用，可以較好的抑制HCMV陽性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖活性；基因沉默ATF5聯(lián)合GCV共同作用對HCMV在mRNA、蛋白水平、子代病毒復(fù)