異煙肼在小鼠不同臟器中對Nrf2-ARE信號通路抑制作用的實驗研究.pdf

1、根據我國腫瘤登記中心發(fā)布的統(tǒng)計數據顯示，我國癌癥的發(fā)病率及死亡率逐年上升。不僅在我國，從世界范圍來看，癌癥已成為危害世界最嚴重的公共衛(wèi)生問題。癌癥的治療手段多樣，如手術切除、化療、介入、生物免疫和中藥等，作為癌癥治療手段之一的化療，可最大程度的殺滅體內的腫瘤細胞，尤其對于晚期腫瘤患者，因此化療在惡性腫瘤的治療中占有特別重要的地位?？萍嫉倪M步使新的化療藥物不斷出現，但是腫瘤患者的臨床療效并未明顯的改善。大量研究發(fā)現，影響化療療效的原因眾多

2、，但其主要原因歸咎于腫瘤化療耐藥性。雖然影響腫瘤化療耐藥性的原因有很多，但主要機制或核心部分并未被發(fā)現。因此，探索腫瘤耐藥機制已成為目前腫瘤研究的熱點。最新研究發(fā)現，導致腫瘤化療耐藥的原因與Nrf2-ARE信號通路關系密切。一旦該信號通路被激活后將會導致解毒酶、抗氧化酶和藥物轉運蛋白的大量生成，共同介導腫瘤的化療敏感性。且細胞核內受ARE介導基因的轉錄是影響腫瘤化療耐藥的關鍵。因此，篩選Nrf2-ARE信號通路的抑制劑是逆轉腫瘤耐藥性的

3、重要策略，由此提高腫瘤的化療敏感性，最終改善惡性腫瘤患者的預后。
　　目的：
　　有研究發(fā)現異煙肼(Isoniazid，INH)能夠抑制多種小鼠和人的細胞系Nrf2-ARE信號通路，但INH對Nrf2-ARE作用的體內研究未見報道。本實驗將研究INH以不同劑量和不同時間處理小鼠后，檢測肝臟和腎臟中Nrf2及其下游基因的表達水平，來探索INH對肝臟和腎臟中Nrf2-ARE信號通路的作用，為后續(xù)INH作為Nrf2抑制劑提高化療敏

4、感性提供動物體內實驗基礎。
　　方法：
　　購自中國醫(yī)科大學動物部的C57BL/6小鼠，6-8周齡，體重20-25 g。將100mg/kg體重的INH通過經口灌胃的方式注入小鼠體內，分別檢測6h和12h時，小鼠肝臟和腎臟中Nrf2及其下游基因的表達水平，探索INH在該臟器中對Nrf2-ARE信號通路有無抑制作用。若存在抑制作用，將獲得抑制作用最強時間點，再選用25 mg/kg體重的INH，驗證低劑量的INH在該時間點是否同樣

5、具有抑制作用。
　　qPCR方法檢測:將小鼠處死后，摘取其肝臟和腎臟，提取目標組織中的總RNA，統(tǒng)一稀釋相同濃度后逆轉錄生成cDNA，將Gapdh基因片段設為待測基因的內參，即Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1和Ho-1基因。統(tǒng)計方法采用單因素方差分析，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　100 mg/kg體重的INH對小鼠肝臟和腎臟中受ARE介導的基因有抑制作用，12h時抑制效果最明顯，無統(tǒng)計學意義;6h