Candida tropicalis激光育種技術(shù)及其降酚特性研究.pdf

1、目前,生物法處理含酚工業(yè)廢水正經(jīng)歷著從傳統(tǒng)的混合微生物處理技術(shù)向純培養(yǎng)微生物處理技術(shù)的轉(zhuǎn)型階段.本文利用傳統(tǒng)的微生物育種技術(shù)從馴化的活性污泥中分離、純化得到二株高活力苯酚降解菌,對(duì)二個(gè)菌株分別進(jìn)行了鑒定,并對(duì)其中的熱帶假絲酵母菌進(jìn)行了系統(tǒng)研究.為提高所得野生型熱帶假絲酵母對(duì)酚類化合物的降解能力,本文利用He-Ne激光輻照熱帶假絲酵母,經(jīng)過(guò)大量的平行性實(shí)驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)在10mW10-15min、12.5mW10-15min和15mW10mi

2、n的劑量范圍內(nèi),可以產(chǎn)生較高的正變率.通過(guò)苯酚降解實(shí)驗(yàn)篩選出70株具有較高苯酚降解能力的正變株,對(duì)這70個(gè)正變株進(jìn)行苯酚降解穩(wěn)定性的考察,最終獲得了具有最高苯酚降解能力和穩(wěn)定遺傳特性的突變株CTM2. 鑒于苯酚羥化酶和鄰苯二酚雙加氧酶在苯酚代謝中所發(fā)揮的決定性作用,本文考察了苯酚羥化酶和鄰苯二酚雙加氧酶的活力,發(fā)現(xiàn)二個(gè)酶在突變株CTM2中的活力都要高于其在野生型菌株中的活力,推測(cè)這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果是由激光輻照所造成的.繼而,本文對(duì)熱帶

3、假絲酵母野生型和突變型的苯酚羥化酶基因序列進(jìn)行了全序列克隆,首次獲得了熱帶假絲酵母苯酚羥化酶的完整基因序列.通過(guò)基因序列比較發(fā)現(xiàn),激光輻照后苯酚羥化酶有4個(gè)氨基酸發(fā)生了突變.另外,苯酚羥化酶的異源表達(dá)進(jìn)一步證實(shí)了細(xì)胞在輻照后苯酚羥化酶的活力提高,從而揭示了激光誘變的生物學(xué)機(jī)理.對(duì)比研究了野生型熱帶假絲酵母及其突變株CTM2降解苯酚、間甲酚及其4-氯酚的特性.其中,二株菌的最大苯酚降解能力分別達(dá)到2000和2600mg/L； 最大