一種高通量克隆方法及其在人類肝臟蛋白質組學上的應用.pdf

1、將外源基因克隆到載體上的過程包括以下幾個步驟：PCR擴增目的基因，產生用于連接的平末端或粘性末端，再將PCR產物插入到合適的載體上。有很多種方法將PCR產物插入載體，如將限制性位點插入到PCR產物的末端、平末端插入、TA克隆、異位交錯克隆、不依賴連接的克隆、活體克隆等。但是，這些方法都沒有應用于大規(guī)模的克隆。 大量的基因組測序計劃的完成，使得數目龐大，功能未知的ORF得到識別，必須將這些基因轉移到各種不同的載體，進行基因的表達

2、和其它功能分析。這就需要出現大規(guī)模高通量的克隆系統。目前，應用較多的高通量克隆系統，有Gateway克隆系統、Clontech克隆系統、Univector融合系統等，這些克隆系統已被商業(yè)化，尤其是Gateway克隆系統應用范圍極為廣泛。但是，因為各個系統都要用到商品化的重組酶，所用的同源序列也較長，故價格昂貴，克隆過程費用較高。 鑒于大規(guī)?？寺〉挠猛?，在別人研究的基礎上，我們實驗室建立了一種適用于高通量克隆的方法。這種方法采用