降鈣素基因相關肽在氣道上皮損傷修復中的作用研究.pdf

1、目的：研究降鈣素基因相關肽對氣道上皮損傷后修復過程的影響，并探討其胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑。 方法：(1)CGRP對人氣道上皮損傷修復的影響：以人支氣管上皮細胞(hliman bronchial epithelial cells，HBECs)株為研究對象，觀察CGRP對HBECs損傷修復指數(shù)的影響；免疫細胞化學方法檢測HBECs增殖相關抗原Ki67的表達；流式細胞儀檢測CGRP對HBECs S期細胞百分率(SPF)和細胞增殖指數(shù)(P

2、I)的影響。(2)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的研究：以HBECs為研究對象，觀察PKC抑制劑H-7和MAPK抑制劑PD98059對CGRP促損傷修復作用的影響；采用凝膠遷移滯后實驗(EMSA)檢測cAMP反應元件結合蛋白(cAMP response elementbinding protein(CREB)與DNA的結合活性，觀察CGRP對其結合能力的影響及PKC、MEK信號途徑在其中的作用。 結果： 1．CGRP對人氣道上皮損傷修

3、復的影響 (1)在體外培養(yǎng)的HBECs細胞層機械刮擦造成缺損。24h后，對照組缺損處已全部長滿，損傷修復指數(shù)(RI)為4.3。隨著CGRP濃度的增加，10<'-10>mol／L～10<'-7>mol／L CGRP可使HBECs的損傷修復速度明顯增快，RI分別為5.8、6.1、6.7、7.6。與對照組相比，差異具有顯著性(P<0.05)。提示CGRP可明顯促進HBECs損傷后的修復，且呈濃度依賴性。 (2)與對照組Ki

4、67陽性細胞標記指數(shù)(LI)值相比，CGRP處理24h后，HBECs的Ki67表達明顯增加，p<0.01；呈濃度依賴性，提示CGRP可明顯促進HBECs Ki67的表達。 (3)與對照組相比，加入CGRP(10<'-8>mol／L)24h后IIBECs的細胞周期發(fā)生明顯變化，S期細胞百分比由(31.3±3.5)％上升到(49.4±5.7)％，G2／M期細胞百分比由(16.5±1.6)％上升到(24.6±1.9)％， (p<0

5、.05)。結果表明，CGRP可明顯增強HBECs的增殖。 2．CGRP促HBECs損傷修復的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的研究 (1)與對照組相比，在CGRP處理組中分別加入H-7和PD98059后，CGRP對HBECs損傷修復速度的促進效應被逆轉(zhuǎn)(P<0.01)?？梢奀GRP發(fā)揮促HBECs損傷修復作用與PKC和MAPK途徑有關。 (2)與對照組相比，CGRP處理組HBECs LI值明顯增大，加入H-7及PD98059預

6、處理可阻斷CGRP促Ki67表達的效應(P<0.01)。 (3)與CGRP處理組相比，加入H-7及PD98059預處理HBECs，CGRP的促SPF及PI效應被逆轉(zhuǎn)(p<0.01)，提示CGRP對HBECs促增殖效應的發(fā)揮與PKC及MAPK途徑有關。 (4)與對照組相比，CGRP可顯著提高HBECs CREB與DNA的結合活性(P<0.01)，其效應可被H-7阻斷，差異有顯著性(P<0.01)。與CGRP處理組相比，

7、CGRP+PD98059組HBECs CREB與DNA的結合活性無明顯變化?？梢姡珻GRP可顯著提高HBECs CREB與DNA的結合活性，其效應的發(fā)揮與PKC途徑有關，而與MEK途徑關系不明顯。 結論： 1．CGRP可加快HBECs的損傷修復過程。 2．CGRP可促進HBECs的增殖。 3．CGRP促HBECs損傷修復及增殖效應的發(fā)揮與PKC及MAPK胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑有關。 4．CGR