結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型的建立及其對結(jié)直腸癌預(yù)后監(jiān)測的臨床意義.pdf

1、目的:
　　篩選結(jié)直腸癌血清中特異表達(dá)的lncRNA，建立結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型，并探討該模型在結(jié)直腸癌診斷及預(yù)后監(jiān)測中的臨床意義。
　　方法:
　　1.初篩階段選取6名結(jié)直腸癌患者，取其結(jié)直腸癌及癌旁正常組織進(jìn)行基因芯片分析，篩選出結(jié)直腸癌與癌旁正常組織間差異表達(dá)的lncRNA。結(jié)合基因芯片結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，選取候選lncRNA分子。
　　2.確證階段采用RT-qPCR技術(shù)，首先在80對結(jié)直腸癌及癌

2、旁組織中對候選lncRNA分子進(jìn)行驗(yàn)證，將其中存在顯著性差異表達(dá)的候選分子在120名結(jié)直腸癌患者及120名對照者血清中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，最終確定在組織及血清中均存在顯著差異表達(dá)的lncRNA分子。將確定的lncRNA分子帶入多元logisitic回歸分析，建立結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型，采用受試者工作曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)分析結(jié)直腸癌血清lncRNA模型的診斷效

3、能。
　　3.驗(yàn)證階段另選取120位結(jié)直腸癌癌患者和120名對照者血清，采用RT-qPCR方法再次驗(yàn)證上一階段確定的差異表達(dá)分子，并評價(jià)血清lncRNA診斷模型在結(jié)直腸癌診斷中的診斷價(jià)值。同時(shí)對這120位結(jié)直腸癌患者和120對照者的血清標(biāo)本CEA進(jìn)行測定，比較血清lncRNA診斷模型與CEA在結(jié)直腸癌診斷中的效能。
　　4.收集并分析驗(yàn)證階段120名結(jié)直腸癌患者的預(yù)后信息。采用Kaplan-Meier分析對結(jié)直腸癌進(jìn)行生存曲

4、線分析，通過Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析可用于結(jié)直腸癌預(yù)后監(jiān)測的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　5.分析篩選出的lncRNA分子在組織和血清中表達(dá)量的相關(guān)性，并檢測lncRNA分子的表達(dá)穩(wěn)定性。
　　結(jié)果:
　　1.初篩階段經(jīng)基因芯片分析，共發(fā)現(xiàn)5873個(gè)差異表達(dá)的lncRNA(≥2個(gè)拷貝，p＜0.05)。根據(jù)基因芯片分析結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，共選取18個(gè)lncRNA分子，其中10個(gè)候選分子來自芯片結(jié)果，8個(gè)分子來自文獻(xiàn)報(bào)道。
　　

5、2.在確證階段，經(jīng)RT-qPCR初次驗(yàn)證，4個(gè)lncRNA分子(BANCR，NR_026817，NR_029373和NR034119)在結(jié)直腸癌組織及血清中均存在顯著差異表達(dá)(均p＜0.001)，其中BANCR表達(dá)上調(diào)，NR_026817，NR_029373和NR_034119表達(dá)均下調(diào)。采用ROC曲線評估BANCR，NR_026817，NR_029373和NR_034119診斷結(jié)直腸癌的受試者工作曲線下面積(area under th

6、e ROC，AUC)，分別為0.638，0.708，0.812和0.724。通過Logistic多元回歸分析建立基于4個(gè)lncRNA分子的結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型，此診斷模型的AUC為0.891(95％CI為0.844-0.927，靈敏度為81.67％，特異度為80.00％)。
　　3.驗(yàn)證階段用RT-qPCR進(jìn)行再次驗(yàn)證，結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型AUC為0.881（95％CI為0.833-0.919，靈敏度為89

7、.17％，特異度75.83％）。其對TNMⅠ、Ⅱ、Ⅲ期結(jié)直腸癌的診斷的AUC分別為0.774、0.844和0.949，明顯高于CEA相應(yīng)的0.588、0695和0.861，(均p＜0.05)。
　　4.Kaplan-Meier分析顯示，低表達(dá)NR_029373和NR_034119結(jié)直腸癌患者較高表達(dá)患者的生存率低(p=0.013和0.044)。多變量Cox回歸分析顯示，NR_029373和NR_034119可以作為結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)

8、后指標(biāo)(p分別為0.013和0.038)。
　　5.4個(gè)lncRNA分子(BANCR，NR_026817，NR_029373和NR_034119)在組織和血清中的表達(dá)量呈線性相關(guān)，且4個(gè)lncRNA分子在室溫放置、反復(fù)凍融等處理后表達(dá)量穩(wěn)定。
　　結(jié)論:
　　1.結(jié)直腸癌血清lncRNA診斷模型(BANCR，NR_026817，NR_029373和NR_034119)對結(jié)直腸癌早期診斷具有一定的臨床意義。
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