塔瑪亞歷山大藻“游動(dòng)孢子”釋放機(jī)制的初步研究.pdf

1、赤潮作為一種世界性的危害，其爆發(fā)時(shí)對(duì)于海洋環(huán)境、水產(chǎn)養(yǎng)殖乃至人類健康都會(huì)造成巨大損害，因此赤潮的起源和防治多年來(lái)一直是眾多專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)。上個(gè)世紀(jì)九十年代提出的微全分析系統(tǒng)，具有微型化、集成化和便攜化等優(yōu)勢(shì)。因此可以利用微流控芯片來(lái)模擬赤潮藻的自然生長(zhǎng)環(huán)境，對(duì)群體及單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行精確的捕捉和控制，這也將為研究赤潮爆發(fā)的機(jī)制以及控制赤潮爆發(fā)提供一個(gè)新的技術(shù)形式。
　　 本研究結(jié)合微流控芯片技術(shù)對(duì)塔瑪亞歷山大藻釋放類似游動(dòng)孢子的生

2、物體（以下簡(jiǎn)稱“游動(dòng)孢子”）現(xiàn)象進(jìn)行了初步的研究。在微流控芯片上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，研究了塔瑪亞歷山大藻的生活史以及游動(dòng)生物體的產(chǎn)生、釋放、相互作用和生長(zhǎng)等動(dòng)態(tài)過程;對(duì)塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞釋放出的游動(dòng)生物體進(jìn)行形態(tài)和分子生物學(xué)鑒定;構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹了解游動(dòng)生物體的進(jìn)化過程對(duì)其進(jìn)行初步分類;對(duì)此游動(dòng)生物體存在的生態(tài)學(xué)意義進(jìn)行研究。
　　 正如Denn等[1]、Garcés等[2]和Leander等[3]在其文章中所講，文中所提到的“游動(dòng)孢子

3、”并非實(shí)際意義上塔瑪亞歷山大藻生活史中的游動(dòng)孢子，而是對(duì)上述塔瑪亞歷山大藻所釋放出來(lái)的微小近球形的游動(dòng)生物體的更加形象的說(shuō)法。本文結(jié)果如下:
　　 (1)制作微流控芯片用于塔瑪亞歷山大藻的培養(yǎng)和“游動(dòng)孢子”的富集。在微流控芯片上對(duì)塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)記錄，觀察到塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞的厚壁孢囊釋放“游動(dòng)孢子”的現(xiàn)象，每個(gè)厚壁孢囊對(duì)于“游動(dòng)孢子”的釋放量不等，最高可達(dá)50個(gè);同時(shí)在微流控芯片上記錄了“游動(dòng)孢子”的二分裂過程。

4、r>　　 (2)塔瑪亞歷山大藻起始密度越低，厚壁孢囊的生長(zhǎng)越緩慢，最大生長(zhǎng)量出現(xiàn)時(shí)間也越晚，不同稀釋濃度下厚壁孢囊的最大生長(zhǎng)點(diǎn)總是出現(xiàn)在塔瑪亞歷山大藻最大生長(zhǎng)點(diǎn)之后的2-4天。
　　 (3)不同培養(yǎng)基濃度下塔瑪亞歷山大藻和“游動(dòng)孢子”的記數(shù)發(fā)現(xiàn)，塔瑪亞歷山大藻的最適生長(zhǎng)培養(yǎng)基濃度為100％的f/2培養(yǎng)基，而“游動(dòng)孢子”的最適生長(zhǎng)培養(yǎng)基濃度則為10％的培養(yǎng)基濃度。強(qiáng)光刺激以及滲透壓改變都會(huì)促使厚壁孢囊裂解，從而釋放“游動(dòng)孢子”。

5、
　　 (4)使用改進(jìn)后的低速離心收集未脫水的方法處理“游動(dòng)孢子”樣品，拍攝掃描電鏡，對(duì)“游動(dòng)孢子”的形態(tài)有個(gè)清晰的了解:細(xì)胞近似圓形，大小為2-4μm;頂部具有兩根不等長(zhǎng)的鞭毛，長(zhǎng)鞭毛是體長(zhǎng)的3-4倍，具有茸毛，而短鞭毛是體長(zhǎng)的2/3倍，沒有茸毛;在鞭毛著生部位正對(duì)面有個(gè)底孔;底孔附近有個(gè)以凹陷起始的縱溝，一直延伸到鞭毛著生處。
　　 (5)提取“游動(dòng)孢子”的基因組，進(jìn)行18s rDNA序列擴(kuò)增，測(cè)序，構(gòu)建游動(dòng)孢子的S