甲基轉移酶SETD7與肝癌預后的相關性及其機制研究.pdf

1、肝細胞癌(HCC)是世界上最常見的腫瘤之一。在中國，HCC的發(fā)病率在各類惡性腫瘤中居第三位，而致死率則居第二位，數據顯示每千萬人中約有2626人死于肝細胞癌。肝細胞癌的發(fā)病原因十分復雜，其中包括基因組變異以及表觀遺傳修飾的改變，如組蛋白修飾的改變、異常的DNA甲基化、microRNA的表達發(fā)生改變等。H3K4的甲基化異常與肝癌的發(fā)病進程相關，而它的甲基化水平受到甲基轉移酶(HMTs)和去甲基化酶的調節(jié)。H3K4 HMTs的異常表達或者基

2、因突變會導致腫瘤的惡化。
　　賴氨酸甲基轉移酶SETD7是包含SET結構域蛋白的家族成員之一，不僅能夠甲基化H3K4促進基因的表達，還能通過甲基化很多非組蛋白底物，調節(jié)蛋白的穩(wěn)定性、轉錄因子的活性以及調控啟動子區(qū)的激活。在代謝相關疾病、病毒感染、腫瘤的形成以及一些炎癥反應中發(fā)揮重要作用。近年來的研究發(fā)現SETD7在腸再生以及腸道腫瘤的生成中發(fā)揮作用，它的高表達與卵巢癌的惡化相關，然而其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還未見報道。本課題的主要

3、目的是為了探索SETD7與肝癌發(fā)生發(fā)展和預后的相關性以及對其在肝癌中發(fā)生中的作用及其相關的分子機制。
　　本課題首先收集了20例原發(fā)性肝細胞癌患者的癌和癌旁組織標本，通過WesternBlot以及QRT-PCR從蛋白水平以及mRNA水平檢測SETD7在組織中的表達情況，發(fā)現SETD7在大部分肝癌組織中的表達高于癌旁;然后，收集225例肝癌患者的臨床資料并通過隨訪了解他們術后的恢復情況，然后篩選出相應的癌和癌旁組織的蠟塊制成組織芯片

4、，通過免疫組織化學(IHC)來檢測SETD7與H3K4me2在組織中的表達情況，并對結果進行評分，運用統(tǒng)計學方法結合臨床資料對結果進行分析。統(tǒng)計結果表明，相對于癌旁組織來說，SETD7在腫瘤組織中高表達;SETD7在腫瘤組織中的表達情況與腫瘤轉移、復發(fā)、分化、腫瘤的尺寸以及H3K4me2相關;SETD7高表達預示患者的預后差。
　　為了了解SETD7影響肝癌進程的機制，我們構建了SETD7過表達質粒，合成SETD7的小干擾RNA(

5、siRNA)，通過在細胞中干擾或過表達SETD7來研究其在肝癌細胞系中的功能。CCK8結果表明SETD7的表達能影響細胞增殖;通過流式細胞術來檢測細胞的周期和凋亡，我們發(fā)現SETD7能通過調節(jié)細胞周期來影響細胞的增殖。為了進一步探究SETD7對基因表達的影響進而對其潛在的功能進行預測，我們通過數字基因表達譜分析(DGE)來探索與SETD7表達相關的靶基因，并通過WesternBlot、QRT-PCR來對DGE結果進行驗證，結果表明SET

6、D7的表達會影響ZBTB20以及CDKN2D的表達水平，通過免疫組化，我們發(fā)現SETD7的表達與ZBTB20以及CDKN2D具有相關性。
　　綜上所述，SETD7在肝癌組織中的表達高于癌旁組織，而且SETD7在肝癌組織中的高表達預示著肝癌的高復發(fā)、高轉移、直徑較大(＞5cm)、低分化;SETD7在肝癌中的表達與H3K4me2相關;SETD7高表達的肝癌患者預后較差;SETD7在肝癌中的表達與ZBTB20以及CDKN2D具有相關性;