產α-環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的菌株分離、產酶條件優(yōu)化與酶學特性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為獲得環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶高產菌株，本論文從菌種的選育入手，研究了菌株的產酶特性，并用優(yōu)化策略優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，對環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶進行了純化，篩選適宜的純化體系，并研究酶的性質，為工業(yè)化生產和應用提供理論依據及參考。結果分述如下：　　菌株分離篩選及鑒定從江西20份土壤樣品中分離篩選出115個產CGTase的菌株，以代號403的菌株產酶水平最高，作為后續(xù)誘變的出發(fā)菌株。采用紫外輻射和硫酸二乙酯復合誘變方法對菌株403進行誘

2、變，得誘變株CLS403，其產酶能力為出發(fā)株的1.43倍。通過形態(tài)學、生理生化指標及16SrRNA序列比對，該誘變菌株為地衣芽孢桿菌。　　菌株產酶條件經碳、氮源及添加劑篩選試驗和正交設計試驗，最適合菌株CLS403產CGTase的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L)：可溶性淀粉14.1g，硝酸銨8g，豆餅8g，KH2PO40.5g，MgSO47H2O0.1g，CaCl20.01g，pH6.5。最適產酶的培養(yǎng)條件為溫度35℃，250mL錐形裝30

3、mL培養(yǎng)基，于180r/min轉速下振蕩培養(yǎng)96h。　　酶的提取純化按優(yōu)化條件發(fā)酵生產的CGTase粗酶液，經淀粉硫酸銨初步純化、DEAE-Cellulose離子交換和SephacrylS-200分子篩層析，CGTase粗酶液被提純63倍，比活力達88.2U/mg。　　酶的性質CLS403菌株的CGTase酶的最適反應pH為6.5，最適反應溫度為50℃；在pH6.0～8.0和45℃以下穩(wěn)定；以可溶性淀粉為底物的米氏常數Km值為3.0

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