PGC-1α調節(jié)黃體生成素和醛固酮合成以及葡萄糖激酶表達的分子機制研究.pdf

1、博士學位論文學校代碼：l0023學號：b2007186PGC1Q調節(jié)黃體生成素和醛固酮合成以及葡萄糖激酶表達的分子機制研究研究生：朱繆孌導師：方福德教授常永生副教授學科專業(yè)：生物化學與分子生物學研究方向：2型糖尿病易感基因的研究入學時間：2005年9月所在院所：基礎醫(yī)學研究所北京協(xié)和醫(yī)學院博上學位論文第一部分PGC1僅協(xié)同SF1調節(jié)黃體生成素和醛固酮合成的研究摘要過氧化物酶體增殖激活受體丫共激活因子1a(PGC1僅)能共刺激多種轉錄因子

2、從而調節(jié)能量代謝進程。核受體類固醇激素生成因子(SF1)在垂體、性腺、腎上腺等內分泌組織中高表達，轉錄調控多種關鍵基因，同時調節(jié)下丘腦垂體性腺軸多水平的激素合成。為探索PGC1Q在類固醇激素合成及垂體激素分泌中的作用，本課題以小鼠垂體促性腺QT31細胞為研究模型，過表達PGC1a后，通過realtimePCR實驗檢測到LHp和QGSU在mIⅢA水平的表達量升高，又進一步通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)證明，PGC1a刺激0【T31細胞

3、分泌的黃體生成素增加。分析LHB啟動子序列，發(fā)現(xiàn)127bp—119bp位點存在一個SFl結合元件GSE(gor砌otropespecificelernem)，突變該元件后，雙熒光報告實驗證明SF1和PGC1a對LHp啟動子的刺激作用全部消失。染色質免疫沉淀實驗證明PGC10【與SF1共定位在LHp啟動子區(qū)含GSE元件的區(qū)域，并促進LHD轉錄。為進一步證明PGC1a對SF1的共刺激作用，分析了二者相互作用的分子機制。哺乳動物雙雜交實驗和免

4、疫共沉淀實驗證明PGC1a與SF1能在體內形成復合物，進一步GSTpulldo、Ⅳn實驗證明二者能直接相互作用。該作用發(fā)生在PGC1僅的N端1～180氨基酸區(qū)域(含LXXLL模體，142～146氨基酸)與SF1C端187~462氨基酸區(qū)之間。構建不同長度的SF一1基因表達片段發(fā)現(xiàn)，只有當SF1的最適激活結構域(proximlactivationdomain)和AF2結構域同時存在時，PGC1a和SF—l才能直接結合。腎上腺皮質是最主要的